基于代謝組學的炙淫羊藿炮制機理研究.pdf

1、淫羊藿-----我國的傳統(tǒng)補益中藥，最初記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》上，其具有補腎壯陽，強健筋骨，祛除風濕的療效。臨床上常采用羊脂油對淫羊藿進行炮制，療效顯著。本課題組前期研究表明:體內(nèi)外實驗結(jié)果顯示，淫羊藿中所含黃酮苷的吸收滲透系數(shù)存在差異性;同時還發(fā)現(xiàn)炮制過程中的“加熱”作用可以促使淫羊藿產(chǎn)生更多易于吸收的生物活性黃酮（例如淫羊藿苷以及寶藿苷Ⅰ）。這些研究均是從腸吸收角度來闡釋淫羊藿的炮制機理，但是淫羊藿炮制后的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及其補腎壯陽增效

2、機制仍不清楚，需要進一步研究。因此，本文基于代謝組學，整體上研究了淫羊藿炮制后化學成分的變化及其補腎壯陽的增效機制。從植物代謝組學方面，比較研究了淫羊藿炮制前后次生代謝產(chǎn)物的差異，期望找出炙淫羊藿的物質(zhì)基礎(chǔ);從藥物代謝組方面研究朝藿定A、箭藿苷B、寶藿苷Ⅰ在大鼠體內(nèi)的代謝產(chǎn)物及其代謝途徑，以期尋找淫羊藿炮制后的增效物質(zhì)基礎(chǔ);基于生物代謝組學，研究了腎陽虛潛在的生物標志物，比較了淫羊藿生品與炮制品對腎陽虛大鼠血漿代謝譜的調(diào)節(jié)作用，以期從整

3、體上評價炙淫羊藿補腎助陽的增效機制。
　　本論文對炙淫羊藿的炮制機理研究、代謝組學的概況和其在中藥及其炮制中的應(yīng)用進行了綜述，實驗環(huán)節(jié)主要分為以下幾個部分:
　　(1)采用纖維素酶水解朝藿定B的方法制備箭藿苷B，酶解反應(yīng)的最佳工藝為pH5.6、溫度50℃、酶與底物的質(zhì)量比0.6、底物質(zhì)量濃度20 mg·mL-1和反應(yīng)時間24 h。該方法簡單可行，產(chǎn)物轉(zhuǎn)化率高，為后續(xù)代謝實驗奠定物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　(2)先采用UPLC-QT

4、OF-MS技術(shù)研究了淫羊藿生品和炮制品的指紋圖譜變化，共標出40個化合物，解析出32個，均為黃酮類化合物;在此基礎(chǔ)上基于代謝組學，采用正交偏最小二乘-判別分析(OPLS-DA)法比較了淫羊藿炮制前后次生代謝產(chǎn)物的差異，確定了11個顯著性差異次生代謝產(chǎn)物，并鑒定了其中9個，分別為8-乙烯-山奈酚，淫羊藿素，淫羊藿次苷Ⅰ/淫羊藿素-3-O-glc，異戊醇基箭藿苷B，淫羊藿素-3-O-rha2(4-OAc)-glu(2OAc)，1，3-異戊二

5、烯基朝藿定C和1，3-異戊二烯基-箭藿苷B-7-O-GluA。
　　(3)采用UPLC/Q-TOF分析技術(shù)鑒定三糖苷（朝藿定A）、二糖苷（箭藿苷B）和單糖苷（寶藿苷Ⅰ）吸收進入大鼠體內(nèi)的代謝產(chǎn)物，并闡明這些代謝產(chǎn)物在大鼠血漿、膽汁、尿液和糞便中的代謝途徑，進而從定性角度闡明朝藿定A、箭藿苷B和寶藿苷Ⅰ在大鼠體內(nèi)的代謝規(guī)律。
　　(4)基于生物代謝組學方法，建立氫化可的松腎虛模型并采用正交偏最小二乘-判別分析(OPLS-DA)

6、法，確定了腎陽虛潛在的生物標志物9個，鑒定出其中5個生物標志物，分別為硬脂酰溶血卵磷脂、十六烷基甘油磷脂酰膽堿、花生四烯?；苎蚜字?、亞油酰基甘油磷脂酰膽堿、十六烷酸溶血磷脂酰膽堿;在此基礎(chǔ)上采用主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘-判別分析(OPLS-DA)法比較了淫羊藿生品與炮制品干預(yù)后腎陽虛大鼠血漿中這些生物標志物的差異和水平變化，同時將這些標志物輸入KEGG數(shù)據(jù)庫中構(gòu)建代謝通路，進而從整體上評價炙淫羊藿補腎助陽的增效作用及其機