pLEGFP-N1基因轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)干細胞的體外穩(wěn)定性和體內(nèi)體外成骨能力應(yīng)用研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、　　目的：兔骨髓中分離獲得高純度間充質(zhì)干細胞(MSCs)進行體外擴增培養(yǎng)；pLEGFP-N1逆轉(zhuǎn)錄病毒基因轉(zhuǎn)染MSCs,檢測攜帶EGFP的MSCs體外蛋白表達能力,獲得高效表達細胞株；觀察研究MSCs和感染EGFP的MSCs體外生長規(guī)律和細胞生物學(xué)特性、體外成骨定向誘導(dǎo)能力和體內(nèi)骨缺損修復(fù)成骨能力。
　　方法：1、抽取兔髂骨骨髓,利用Percoll分離液(1.073g/ml)進行密度梯度離心法從骨髓中分離骨髓間充質(zhì)干細胞,體外培養(yǎng)

2、擴增。
　　2、擴增重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體PLNCX-EGFP。重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體PLNCX-EGFP感染PT67包裝細胞,MSCs轉(zhuǎn)染,進行蛋白表達,攜帶EGFP的MSCs體外培養(yǎng)檢測。
　　3、體外培養(yǎng)同生長期MSCs和轉(zhuǎn)染了EGFP的MSCs,通過細胞生長曲線、吸光度測定,檢測堿性磷酸酶表達、骨鈣素生成對其進行定性檢測和觀察；同時向成骨細胞定向誘導(dǎo)分化,觀察二者體外成骨能力。
　　4、兔下頜骨人造骨缺損模型,Ⅰ型膠原

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