新型重組人內(nèi)毒素結合肽突變體的設計與構建.pdf

1、背景與目的：
　　 DNA錯配修復(mismatch repair,MMR)基因在維持基因組穩(wěn)定性中起關鍵作用。大部分的遺傳性結直腸癌由MMR基因種系突變引起,即遺傳性非息肉病性結直腸癌(hereditary nonpolyposis colorectal cancer,HNPCC)。另外有10-15％的散發(fā)性結直腸癌是由錯配修復基因hMLH1表遺傳學失活所致。MMR功能障礙導致的結直腸癌表現(xiàn)為微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(microsate

2、lliteinstability,MSI)。既往研究表明,在HNPCC家族中,男性突變攜帶者患結直腸癌的風險高于女性突變攜帶者;在中國人HNPCC家系中也發(fā)現(xiàn)了類似情況。這種HNPCC發(fā)病率上的性別差異可能與雌激素有關。有研究報道絕經(jīng)后雌激素替代治療能降低MSI陽性結腸癌風險,因此推測雌激素可以預防MMR功能缺陷引起的結直腸癌。事實上,近年來大量臨床研究已證實,雌激素對結直腸癌可能有預防作用,但是其機制仍不明確。根據(jù)以上臨床現(xiàn)象,可以假

3、設:雌激素可能通過影響結直腸細胞的MMR基因表達和功能來預防結直腸癌的發(fā)生。但迄今尚無研究雌激素對結腸上皮細胞MMR基因表達影響的報道。因此本實驗研究了正常人血清雌激素水平與結腸上皮細胞中兩種代表性的MMR基因(hMLH1、hMSH2)表達水平的關系,為這一假說提供證據(jù)。
　　 材料與方法
　　 共選取結腸鏡檢查正常的健康人42例。于結腸鏡檢查前半小時抽血測定其血清雌二醇(estradiol,E2)水平。結腸鏡下于右半結

4、腸取肉眼觀正常的結腸粘膜組織,用于提取總RNA進行半定量RT-PCR,及經(jīng)甲醛固定、石蠟包埋后用于免疫組化染色,分別評定hMLH1、hMSH2基因的mRNA相對表達量和蛋白免疫組化染色陽性指數(shù)(positivity index,PI)。然后分析血清E2水平與結腸粘膜hMLH1和hMSH2表達量的關系。
　　 結果
　　 正常人血清E2水平與結腸上皮細胞hMLH1基因的表達量之間存在雙峰曲線關系,三次方程模型為描述這一關系