從母系遺傳和表觀遺傳學(xué)來(lái)研究腎陰虛型慢性再生障礙性貧血的發(fā)病機(jī)制.pdf

1、目的:研究腎陰虛型慢性再生障礙性貧血(CAA)患者線粒體突變情況和骨髓中ID4基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài),探討母系遺傳的本質(zhì)——線粒體和表觀遺傳學(xué)與腎陰虛型慢性再障發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系,以期進(jìn)一步研究慢性再障的發(fā)病機(jī)制。方法:收集8例診斷明確的腎陰虛型CAA患者骨髓和口腔黏膜上皮,另收集2例健康人骨髓做正常對(duì)照(僅用于ID4基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化的對(duì)照),提取DNA。應(yīng)用甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)(MS-PCR)檢測(cè)ID4基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài);進(jìn)行

2、線粒體DNA的全測(cè)序,在骨髓標(biāo)本中與劍橋序列不一致的位點(diǎn)再與同一患者的口腔上皮正常組織的序列比較,若此位點(diǎn)的變化在口腔上皮組織中未出現(xiàn),則定義為突變;若在骨髓標(biāo)本和口腔上皮中均出現(xiàn),則定義為多態(tài)。從中西醫(yī)兩種醫(yī)學(xué)的母系遺傳角度探討其發(fā)病機(jī)制,并對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果:(1)線粒體全測(cè)序表明許多患者的突變位點(diǎn)發(fā)生在與線粒體氧化呼吸鏈密切相關(guān)的區(qū)域,涵蓋了了ND1-5、ND4L、ATP6、CYTB等多個(gè)線粒體DNA的編碼基因。而很多的DNA多

3、態(tài)性則位于D-loop區(qū)。(2)8名CAA患者均檢測(cè)到了ID4基因的甲基化。結(jié)論:(1)線粒體呼吸鏈酶復(fù)合體表達(dá)水平的改變,可能導(dǎo)致線粒體呼吸鏈氧化磷酸化解偶聯(lián)、“電子漏”產(chǎn)生ROS引起氧化應(yīng)激和能量代謝障礙,這些變化共同參與造血干細(xì)胞衰竭的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。因此,線粒體基因突變導(dǎo)致的呼吸鏈功能障礙可能在慢性再障的發(fā)病過(guò)程中起重要作用。(2)在所有患者骨髓細(xì)胞中均檢測(cè)到了ID4基因甲基化,表觀遺傳學(xué)在CAA的發(fā)病機(jī)制中起到一定的作用,有助于