脫氫表雄酮調(diào)節(jié)HepG2-GFP-HBx細(xì)胞p16基因甲基化及其與細(xì)胞周期和凋亡的相關(guān)性.pdf

1、目的：探討乙型肝炎病毒X蛋白（HBx）與p16基因甲基化的關(guān)系，研究脫氫表雄酮（DHEA）對(duì)p16基因甲基化以及細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)作用。 方法：以穩(wěn)定表達(dá)綠色熒光蛋白基因/HBV X基因（GFP/HBV X）融合蛋白的HepG2細(xì)胞系作為本課題的實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)。MTT法檢測(cè)已穩(wěn)定表達(dá)HBV X蛋白的HepG2/GFP—HBx細(xì)胞、HepG2/GFP、HepG2細(xì)胞加DHEA后細(xì)胞的生長(zhǎng)情況，通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期和凋亡的變化

2、。通過(guò)甲基化特異性PCR（MSP）檢測(cè)胞內(nèi)p16基因的甲基化狀態(tài)。采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析，P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果：MTT檢測(cè)表明與HepG2和HepG2/GFP組相比，HepG2/GFP—HBx組細(xì)胞的增殖速度提高（P<0.05）。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)示HepG2/GFP—HBx細(xì)胞G0/G1期細(xì)胞百分比38.65％±1.32％，較HepG2/GFP、HepG2的46.63％±1.37％，47.08

3、％±1.55％顯著減少（P<0.05），細(xì)胞分裂周期縮短。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)示HepG2/GFP—HBx細(xì)胞凋亡率0.3％±0.05％，較HepG2/GFP、HepG2細(xì)胞的凋亡率3.6％±0.5％，3.7％±0.6％顯著減少（P<0.05）。MSP檢測(cè)表明，表達(dá)GFP/HBx融合蛋白的HepG2/GFP—HBx肝癌細(xì)胞出現(xiàn)了p16基因甲基化，不表達(dá)HBx的HepG2和HepG2/GFP細(xì)胞未見(jiàn)可檢測(cè)的p16基因甲基化。加100μ mol/

4、1的DHEA后，三種細(xì)胞的增殖速度降低（P<0.05），HepG2/GFP—HBx、HepG2/GFP、HepG2細(xì)胞G0/G1期細(xì)胞百分比分別為57.69％±2.11％、71.78％±2.84％、72.74％±2.75％，較未加藥組顯著增加（P<0.05），分裂周期延長(zhǎng)。HepG2/GFP—HBx、HepG2/GFP、HepG2細(xì)胞凋亡率分別為9.3％±0.8％、19.4％±1.2％、19.8％±1.1％，較未加藥組顯著增加（P<0.