第二性征發(fā)育不良青少年的細(xì)胞及分子遺傳學(xué)分析.pdf

1、在已婚育齡夫婦中約有15%不育，造成不孕不育的病因包括：器質(zhì)性病變、內(nèi)分泌性疾病、神經(jīng)因素、免疫因素、遺傳因素和感染等。第二性征發(fā)育不良在不孕不育患者中占有相當(dāng)大的比例，對于此類患者病因的診斷主要集中在激素水平檢測、免疫學(xué)檢查、細(xì)胞遺傳學(xué)檢查，分子遺傳學(xué)的檢查進(jìn)行較少，其中造成患者第二性征發(fā)育不良的Kallmann綜合癥（KS）的相關(guān)基因的檢查開展不多。Kallmann綜合癥是一種先天性促性腺功能低下和嗅覺障礙聯(lián)合出現(xiàn)的病癥，發(fā)病率男性

2、為1/10000，女性為1/50000[1,2]。Kallmann綜合癥分為遺傳型和散發(fā)型，當(dāng)前的研究已發(fā)現(xiàn)該病的三種遺傳方式（AD,AR,X連鎖）及其相關(guān)的疾病基因[1,3,4,5]，其發(fā)病機(jī)制是下丘腦完全或不完全喪失合成分泌促性腺激素釋放激素(GnRH)的能力。細(xì)胞分子生物學(xué)技術(shù)已廣泛應(yīng)用于遺傳病的診斷，外周血染色體G顯帶可發(fā)現(xiàn)較明顯的染色體異常（數(shù)目和較明顯的結(jié)構(gòu)變化），F(xiàn)ISH和多重PCR技術(shù)可發(fā)現(xiàn)小片段基因的缺失[6,7]。因

3、遺傳因素造成的第二性征發(fā)育不良患者中，Kallmann患者占有相當(dāng)比例。近年來隨著對該病的重視和篩查力度的加大，發(fā)病率有所上升。KS患者大多是成年后因第二性征不明顯、不育癥或性功能障礙等原因前來就診，臨床上一般是將臨床癥狀和性激素水平作為此病診斷和治療的定量指標(biāo)，技術(shù)設(shè)備成熟的醫(yī)院已將分子生物學(xué)檢查引入常規(guī)檢驗，作為該病的治療參考。KS患者的治療取決于對本病的早期診斷，并且治療具有較強(qiáng)的年齡階段性特征，越早發(fā)現(xiàn)越有利于更好的進(jìn)行針對性治

4、療[8,9,10]，所以對青少年第二性征發(fā)育不良患者進(jìn)行基因檢測顯得極為重要。該病相關(guān)基因中，對KAL-1的研究進(jìn)行的最早，方法也最為成熟，現(xiàn)已建立起分別針對KAL-1基因大片段缺失的熒光原位雜交法（FISH）和外顯子缺失的多重PCR法[11,12]。
　　 目的：對2008年3月至2009年2月，在華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院遺傳室以及其他醫(yī)院因不育不孕做遺傳檢查的1357名患者中,尤其是青少年患者，根據(jù)登記的患者第二性狀特征，選取

5、收集了29例患者作為研究對象,患者均為男性，外生殖器第二性征發(fā)育不良，部分病例伴有嗅覺障礙。對其進(jìn)行KAL-1基因的FISH和多個外顯子的PCR檢測，分析KAL-1基因的突變情況，討論其與青少年第二性征發(fā)育不良的關(guān)系，為臨床上對該病的診斷治療和研究提供參考。
　　 方法：按照知情同意原則抽取患者外周血，培養(yǎng)外周血淋巴細(xì)胞做常規(guī)G顯帶染色體核型分析，并留存一份細(xì)胞懸液，用于做FISH及外顯子的PCR檢測。無留存細(xì)胞懸液的可用手術(shù)刀

6、片刮取少量G顯帶玻片上殘留細(xì)胞進(jìn)行多重PCR檢測。
　　 結(jié)果：PCR結(jié)果顯示，在收集到的29份病例中，有3份KAL-1基因發(fā)生突變，突變率約為10.3%，其中一名患者2號外顯子缺失，另一同胞兄弟的外顯子5號～9號均缺失。FISH結(jié)果和PCR基本一致，2號外顯子缺失的患者FISH顯示正常，而同胞兄弟患者的外顯子5～9號缺失，缺失片段過長導(dǎo)致FISH結(jié)果為陰性。
　　 結(jié)論：本次研究中KAL-1基因的突變率為10.3%，所