ABCB1基因多態(tài)性在癲癇患者中的分布及其與抗癲癇藥物療效的相關(guān)性研究.pdf

1、癲癇是神經(jīng)系統(tǒng)的常見疾病,60％的患者經(jīng)藥物治療發(fā)作可得到控制,但有20-30％的患者應(yīng)用多種藥物后,發(fā)作仍控制不佳。大量研究表明,這可能與患者的藥物耐受基因有關(guān),其中ABCBl基因被認(rèn)為和癲癇耐藥關(guān)系最為密切。本研究應(yīng)用分子流行病學(xué)的方法,通過在ABCB1全基因范圍內(nèi)選取標(biāo)簽SNPs,研究ABCB1基因多態(tài)性在癲癇患者中的分布及其與耐藥的相關(guān)性,以及該多態(tài)性與奧卡西平藥物劑量、血藥濃度和血藥濃度劑量比的關(guān)系。本研究主要由三部分構(gòu)成。<

2、br>　　第一部分ABCB1基因多態(tài)性在癲癇患者中的分布及其與抗癲癇藥物療效的關(guān)系
　　目的:觀察多藥耐藥基因ABCB1多態(tài)性在癲癇患者中的分布特點(diǎn),并探討其與癲癇耐藥的相關(guān)性。
　　方法:收集應(yīng)用抗癲癇藥物(antiepileptie drugs,AEDs)治療的癲癇患者的臨床資料,采集患者靜脈血。癲癇患者按照以下標(biāo)準(zhǔn)分為耐藥組和控制有效組。耐藥組:服用三種或三種以上AEDs,癲癇發(fā)作次數(shù)在就診前一年仍超過4次(包括4次)

3、;控制有效組:應(yīng)用AEDs治療,就診前一年無癲癇發(fā)作。根據(jù)HapMalp數(shù)據(jù)庫中CHB(中國北京漢族人)的SNPs數(shù)據(jù),通過Haploview軟件的Tagger程序在ABCB1全基因范圍內(nèi)選擇標(biāo)簽SNPs。以MALDI-TOFMS技術(shù)檢測ABCB1基因C3435T和標(biāo)簽SNPs的基因型,應(yīng)用基于最大似然(expectatibn maximization)算法的SHEsis軟件進(jìn)行單體型推斷。應(yīng)用病例對照研究,分析ABCB1基因多態(tài)性在癲

4、癇患者中的分布特點(diǎn),通過Logistic回歸模型評估各基因型與癲癇耐藥發(fā)生風(fēng)險的相關(guān)程度,并計算比數(shù)比(Ors)及95％可信區(qū)間(Cis)。
　　結(jié)果:共入選了218例癲癇患者(男性123例,女性95例),其中耐藥組132例,控制有效組86例。通過Tagger程序,選取了13個標(biāo)簽SNPs。其中rs10234411位點(diǎn)多態(tài)性方面,耐藥組TT基因型的分布頻率明顯高于控制有效組,AA基因型的頻率低于控制有效組(p=0.013);T等位

5、基因在耐藥組的頻率高于控制有效組(p=0.045);rs1002204:多態(tài)性方面,耐藥組TT基因型的分布頻率明顯高于控制有效組,非TT基因型的頻率低于控制有效組(p=0.038);T等位基因在耐藥組的頻率高于控制有效組(p=0.033)。單體型推斷發(fā)現(xiàn),rs10234411和rs1002204位點(diǎn)構(gòu)成的T-T單體型在耐藥組頻率明顯高于控制有效組,T-T單體型發(fā)生耐藥的風(fēng)險是其他單體型的1.774倍(OR=1.774,95％CI:1.1

6、72-2.686,p=0.006)。ABCB1 C3435T和其他標(biāo)簽SNPs各基因型和等位基因在耐藥組和控制有效組的分布無差異(p＞0.05)。
　　多因素Logistic回歸分析顯示,rs10234411TT基因型是癲癇耐藥的獨(dú)立危險因素,在平衡了“性別”、“年齡”、“發(fā)病年齡”、“全面性發(fā)作”、“部分性發(fā)作”、“熱性驚厥”、“開始用藥與首次發(fā)作時間間隔”和“開始用藥前發(fā)作次數(shù)”后,TT基因型發(fā)生耐藥的風(fēng)險是非TT基因型者的4

7、.414倍(OR=4.414,95％CI:1.483-13.141,p=0.008);“開始用藥前發(fā)作超過6次”是癲癇耐藥的獨(dú)立危險因素,開始用藥前癲癇發(fā)作次數(shù)超過6次者發(fā)生耐藥的風(fēng)險是6次以內(nèi)者的4.437倍(0R=4.437,95％CI:2.282-8.625,p=0.000);“部分性發(fā)作”是癲癇耐藥的獨(dú)立危險因素,部分性發(fā)作的患者發(fā)生耐藥的風(fēng)險為非部分性發(fā)作者的7.807倍(OR=7.807,95％CI:3.075-19.822

8、,p=0.000)。
　　結(jié)論:ABCB1 rs10234411位點(diǎn)TT基因型與癲癇耐藥顯著相關(guān);ABCB1 rs1002204位點(diǎn)TT基因型可能和耐藥具有相關(guān)性。未發(fā)現(xiàn)ABCB1其他SNPs多態(tài)性與耐藥的聯(lián)系。
　　第二部分ABCB1 C3435T和標(biāo)簽SNPs位點(diǎn)不同基因型癲癇患者的臨床療效隨訪研究
　　目的:探討ABCB1 C3435T和標(biāo)簽SNPs位點(diǎn)不同基因型對癲癇治療效果的影響。
　　方法:收集癲癇患

9、者臨床資料。癲癇患者包括新診斷患者和改變治療方案患者。新診斷患者是指已確診為癲癇,未服用過AEDs;或曾經(jīng)服用過AEDs,已停藥一年以上,再發(fā)后,準(zhǔn)備開始藥物治療。改變治療方案患者是指患者已經(jīng)正規(guī)應(yīng)用AEDs治療,發(fā)作未能控制,準(zhǔn)備換用或加用另一種AED治療。以MALDI-TOFMS技術(shù)檢測入組患者ABCBl基因C3435T和標(biāo)簽SNPs的基因型。應(yīng)用前瞻性研究,隨訪不同基因型患者的臨床療效,療效評價指標(biāo)包括出現(xiàn)發(fā)作時間(time to

10、 first seizure)和達(dá)一年無發(fā)作時間(time to 1-year seizure free)。采用Kaplan-Meier生存曲線和Log-rank檢驗(yàn)分析不同基因型組用藥后累積出現(xiàn)發(fā)作患者比例和達(dá)一年無發(fā)作患者比例的差異,并通過Cox比例風(fēng)險模型計算不同基因型患者用藥后出現(xiàn)發(fā)作和達(dá)一年無發(fā)作的相對危險度。
　　結(jié)果:共入選癲癇患者240例(男性136例,女性104例)。Log-rank檢驗(yàn)比較不同基因型組累積出現(xiàn)發(fā)

11、作患者比例和達(dá)一年無發(fā)作患者比例的差異。結(jié)果發(fā)現(xiàn):
　　用藥后累積出現(xiàn)發(fā)作比例:rs1002204位點(diǎn)不同基因型組隨時間變化出現(xiàn)發(fā)作的患者比例存在差異,TT基因型組隨時間變化出現(xiàn)發(fā)作的患者比例最高,其次為GT型組,GG基因型組出現(xiàn)發(fā)作的患者比例最低(p=0.034)。研究終點(diǎn)時,TT型、GT型和GG型組患者出現(xiàn)發(fā)作的比例分別為86.4％、66.5％和63.9％。Rs10234411位點(diǎn)不同基因型組隨時間變化出現(xiàn)發(fā)作的患者比例也存在

12、差異,TT基因型組隨時間變化出現(xiàn)發(fā)作的患者比例最高,其次為AT型組,從基因型組出現(xiàn)發(fā)作的患者比例最低(p=0.045)。研究終點(diǎn)時,TT型、AT型和AA型組患者出現(xiàn)發(fā)作的比例分別為83.7％、66.2％和63.9％。
　　用藥后達(dá)一年無發(fā)作比例:rs1002204位點(diǎn)不同基因型組患者隨時間變化達(dá)一年無發(fā)作的比例存在差異,TT基因型組隨時間變化達(dá)一年無發(fā)作的患者比例最低,其次為GT型組,GG基因型組達(dá)一年無發(fā)作的患者比例最高(p=0

13、.046)。研究終點(diǎn)時,TT型、GT型和GG型組患者達(dá)一年無發(fā)作的比例分別為16.2％、24.6％和32.4％。
　　Cox比例風(fēng)險模型分析不同基因型對患者累積出現(xiàn)發(fā)作比例和達(dá)一年無發(fā)作比例的影響,發(fā)現(xiàn):
　　用藥后累積出現(xiàn)發(fā)作比例:在平衡“年齡”、“性別”、“發(fā)病年齡”、“全面性發(fā)作”、“部分性發(fā)作”和“開始用藥前發(fā)作次數(shù)”后,rs1002204位點(diǎn)TT基因型組用藥后出現(xiàn)發(fā)作的相對危險度為GG基因型組的1.958倍(RR=

14、1.958,95％CI:1.243-3.085,p=0.004),為GT基因型組的1.638倍(RR=1.638,95％CI:1.068-2.510,p=0.024)。
　　用藥后累積達(dá)一年無發(fā)作比例:尚未發(fā)現(xiàn)ABCB1 C3435I、和13個標(biāo)簽SNFs位點(diǎn)不同基因型對患者用藥后達(dá)一年無發(fā)作比例存在獨(dú)立影響。
　　結(jié)論:ABCB1 rs1002204和rs10234411位點(diǎn)不同基因型與AEDs療效相關(guān)。Rs1002204

15、位點(diǎn)TT基因型患者更易于發(fā)生耐藥,GG基因型患者更易于控制;rs10234411位點(diǎn)TT基因型患者可能更易于耐藥,從基因型患者可能更易于控制。
　　第三部分ABCB1 rs1002204和rs10234411位點(diǎn)多態(tài)性與癲癇患者奧卡西平劑量、血藥濃度及血藥濃度劑量比的相關(guān)性
　　目的:比較ABCB1 rs1002204和rs10234411位點(diǎn)不同基因型組患者奧卡西平(OXC)用藥劑量、血藥濃度和血藥濃度劑量比(C/D比值)

16、的差異。
　　方法:納入單用OXC治療的癲癇患者。以MALDI-TOFMS技術(shù)檢測入組患者ABCB1基因C3435T和標(biāo)簽SNPs的基因型。應(yīng)用高效液相色譜法測定OXC代謝物單羥卡馬西平(MHD)的血藥濃度,分析rs1002204和10234411位點(diǎn)多態(tài)性與患者OXC劑量、濃度及C/D比值的關(guān)系。
　　結(jié)果:共47例(男性27例,女性20例)患者完成MHD濃度檢測。Rs1002204:位點(diǎn)TT型組患者每千克體重OXC劑量高

17、于GG型(p=0.018)和GT型組(p=0.007);TT型組患者每千克體重MHD濃度高于GG型(p=0.025)和GT型組(p=0.040);rs10234411位點(diǎn)TT型組患者每千克體重OXC劑量高于AA型(p=0.001)和AT型組(p=0.000);TT型組患者每千克體重MHD濃度高于AA型(p=0.013)和AT型組(p=0.017);rs1002204和rs10234411位點(diǎn)不同基因型患者OXC的血液中C/D比值無統(tǒng)計學(xué)