海螵蛸多糖的分離純化及生物學(xué)活性研究.pdf

1、本論文主要包括兩部分內(nèi)容：一、海螵蛸多糖的提取分離及活性組分CPS-1的純化；二、海螵蛸多糖CPS-1對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎的作用及其它生物學(xué)活性。 研究背景：很多傳統(tǒng)名貴中草藥都來(lái)源于海洋，到目前為止，對(duì)海洋生物多糖的研究主要集中于藻類(lèi)多糖，對(duì)于來(lái)源于動(dòng)物體軟組織的中草藥活性多糖的研究還未見(jiàn)報(bào)道。海螵蛸，又名烏賊骨，為傳統(tǒng)中藥材。有收斂止血、斂瘡等作用.應(yīng)用廣泛。烏賊骨在臨床多用于治療各種潰瘍，具有很好的療效。它本身作為食品加工行業(yè)的

2、廢料，少數(shù)回收作為中藥材，大部分都沒(méi)有得到很好的利用。 研究方法與結(jié)果：海螵蛸購(gòu)于浙江舟山，為東海曼氏無(wú)針烏賊(由浙江省海洋學(xué)院海洋生物教研室趙盛龍教授鑒定)的骨狀內(nèi)殼，拉丁名為OsSepiae。粉碎后用95％乙醇浸提脫脂，沸水提取，乙醇沉淀過(guò)夜。復(fù)溶于水，用苯酚-氯仿法除去雜蛋白，濃縮，流水透析24小時(shí)除去小分子化合物及鹽類(lèi)，冷凍干燥，得到海螵蛸粗多糖，為棕褐色粉末狀固體，水溶性一般。海螵蛸粗多糖經(jīng)DEAESepharoseF

3、astFlow離子交換柱層析得到水洗部分和鹽洗(0.5M的氯化鈉)部分。將水洗部分收集濃縮，冷凍干燥。再依次經(jīng)過(guò)SephacrylS-300分子篩柱，收集得到海螵蛸多糖CPW-2；將鹽洗部分收集濃縮，冷凍干燥。再依次經(jīng)過(guò)SephacrylS-300分子篩柱、SepharoseCL-6B離子交換柱，收集得到海螵蛸多糖CPS-1。使用HPLC法測(cè)定了兩個(gè)均一多糖CPW-2和CPS-1的平均分子量。標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法測(cè)定含糖量。通過(guò)GC分析測(cè)定CPS

4、-1的糖組成。通過(guò)紅外掃描圖譜、NMR-C譜、高碘酸氧化、糖醛酸含量及甲基化分析等方法初步鑒定CPS-1的結(jié)構(gòu)。 采用低分子量葡聚糖硫酸鈉(DSS)誘導(dǎo)法來(lái)建立小鼠實(shí)驗(yàn)性潰瘍性結(jié)腸炎模型。30只BALB/c小鼠隨機(jī)分為5組，每組6只，分別為：(1)空白對(duì)照組，為正常健康小鼠，不誘導(dǎo)UC，正常飼養(yǎng)，每天腹腔注射0.1ml生理鹽水；(2)陰性對(duì)照組，誘導(dǎo)UC，不進(jìn)行藥物治療，從飲用DSS溶液的第3天開(kāi)始每天腹腔注射0.1ml生理鹽水

5、；(3)陽(yáng)性對(duì)照組，從飲用DSS溶液的第3天開(kāi)始每天腹腔注射0.1mlSMZ+TMP(2.5mg/ml)，連續(xù)7天；(4)CPS-1低劑量組，從飲用DSS溶液的第3天開(kāi)始每天注射2mg/mlCPS-10.1ml，連續(xù)7天；(5)CPS-1高劑量組，從飲用DSS溶液的第3天開(kāi)始每天注射5mg/mlCPS-10.1ml，連續(xù)7天。對(duì)所有實(shí)驗(yàn)小鼠提供相同的飼養(yǎng)條件。分別測(cè)定每組小鼠血液中的EGF(表皮生長(zhǎng)因子)、TNF-α(腫瘤壞死因子)和P

6、DGF(血小板衍生生長(zhǎng)因子)的含量。結(jié)果證明海螵蛸多糖CPS-1能夠明顯的提高UC小鼠血液中EGF和PDGF的含量，加速潰瘍組織的愈合；同時(shí)降低TNF-α的表達(dá)，從而緩解炎癥。結(jié)果顯示海螵蛸多糖CPS-1能夠加速潰瘍組織的愈合和修復(fù)過(guò)程。從糖生物學(xué)的角度對(duì)海螵蛸作為潰瘍用藥的藥物作用機(jī)理進(jìn)行初步分析。體外其它活性實(shí)驗(yàn)表明海螵蛸多糖CPS-1還具有明顯的抗氧化、抗病毒等生物學(xué)活性。 研究意義：本研究為首次從東海曼氏無(wú)針烏賊的骨狀內(nèi)