海螵蛸多糖的分離純化及生物學活性研究.pdf

1、本論文主要包括兩部分內(nèi)容：一、海螵蛸多糖的提取分離及活性組分CPS-1的純化；二、海螵蛸多糖CPS-1對潰瘍性結腸炎的作用及其它生物學活性。 研究背景：很多傳統(tǒng)名貴中草藥都來源于海洋，到目前為止，對海洋生物多糖的研究主要集中于藻類多糖，對于來源于動物體軟組織的中草藥活性多糖的研究還未見報道。海螵蛸，又名烏賊骨，為傳統(tǒng)中藥材。有收斂止血、斂瘡等作用.應用廣泛。烏賊骨在臨床多用于治療各種潰瘍，具有很好的療效。它本身作為食品加工行業(yè)的

2、廢料，少數(shù)回收作為中藥材，大部分都沒有得到很好的利用。 研究方法與結果：海螵蛸購于浙江舟山，為東海曼氏無針烏賊(由浙江省海洋學院海洋生物教研室趙盛龍教授鑒定)的骨狀內(nèi)殼，拉丁名為OsSepiae。粉碎后用95％乙醇浸提脫脂，沸水提取，乙醇沉淀過夜。復溶于水，用苯酚-氯仿法除去雜蛋白，濃縮，流水透析24小時除去小分子化合物及鹽類，冷凍干燥，得到海螵蛸粗多糖，為棕褐色粉末狀固體，水溶性一般。海螵蛸粗多糖經(jīng)DEAESepharoseF

3、astFlow離子交換柱層析得到水洗部分和鹽洗(0.5M的氯化鈉)部分。將水洗部分收集濃縮，冷凍干燥。再依次經(jīng)過SephacrylS-300分子篩柱，收集得到海螵蛸多糖CPW-2；將鹽洗部分收集濃縮，冷凍干燥。再依次經(jīng)過SephacrylS-300分子篩柱、SepharoseCL-6B離子交換柱，收集得到海螵蛸多糖CPS-1。使用HPLC法測定了兩個均一多糖CPW-2和CPS-1的平均分子量。標準曲線法測定含糖量。通過GC分析測定CPS

4、-1的糖組成。通過紅外掃描圖譜、NMR-C譜、高碘酸氧化、糖醛酸含量及甲基化分析等方法初步鑒定CPS-1的結構。 采用低分子量葡聚糖硫酸鈉(DSS)誘導法來建立小鼠實驗性潰瘍性結腸炎模型。30只BALB/c小鼠隨機分為5組，每組6只，分別為：(1)空白對照組，為正常健康小鼠，不誘導UC，正常飼養(yǎng)，每天腹腔注射0.1ml生理鹽水；(2)陰性對照組，誘導UC，不進行藥物治療，從飲用DSS溶液的第3天開始每天腹腔注射0.1ml生理鹽水

5、；(3)陽性對照組，從飲用DSS溶液的第3天開始每天腹腔注射0.1mlSMZ+TMP(2.5mg/ml)，連續(xù)7天；(4)CPS-1低劑量組，從飲用DSS溶液的第3天開始每天注射2mg/mlCPS-10.1ml，連續(xù)7天；(5)CPS-1高劑量組，從飲用DSS溶液的第3天開始每天注射5mg/mlCPS-10.1ml，連續(xù)7天。對所有實驗小鼠提供相同的飼養(yǎng)條件。分別測定每組小鼠血液中的EGF(表皮生長因子)、TNF-α(腫瘤壞死因子)和P

6、DGF(血小板衍生生長因子)的含量。結果證明海螵蛸多糖CPS-1能夠明顯的提高UC小鼠血液中EGF和PDGF的含量，加速潰瘍組織的愈合；同時降低TNF-α的表達，從而緩解炎癥。結果顯示海螵蛸多糖CPS-1能夠加速潰瘍組織的愈合和修復過程。從糖生物學的角度對海螵蛸作為潰瘍用藥的藥物作用機理進行初步分析。體外其它活性實驗表明海螵蛸多糖CPS-1還具有明顯的抗氧化、抗病毒等生物學活性。 研究意義：本研究為首次從東海曼氏無針烏賊的骨狀內(nèi)