小薊多糖的分離純化及生物學(xué)作用研究.pdf

1、小薊Cephalanoplossegetum(Bge.)Kitam俗稱刺兒菜、野紅花、青青菜，為菊科植物，在我國分布廣泛，資源豐富。它具有涼血止血,祛瘀消腫的功能，為傳統(tǒng)的中藥。小薊同時也可以食用，作為藥食兩用的野生植物資源含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，為人們喜愛的民間野菜。多糖具有豐富的藥理活性，且無毒副作用，已廣泛應(yīng)用于臨床及保健品市場。為了進(jìn)一步開發(fā)利用小薊資源，本試驗對小薊多糖的提取分離、組成結(jié)構(gòu)及其生物活性進(jìn)行了研究。 本實驗以

2、陜西周至的小薊干料為原料，進(jìn)行了小薊營養(yǎng)成分的測定；小薊多糖的最佳提取工藝、分離純化及對所得組分進(jìn)行了純度鑒定、分子量測定和組成分析；采用H2O2/Fe2+體系和Fe2+誘發(fā)卵黃脂蛋白PUFA過氧化體系研究小薊多糖半純品的體外抗氧化活性；通過動物實驗進(jìn)行了小薊粗多糖生物學(xué)作用研究。通過以上研究，為綜合開發(fā)利用小薊資源提供參考和依據(jù)。 主要實驗結(jié)果如下： 1.小薊中灰分含量為8.760％、粗蛋白質(zhì)含量為4.470％粗脂肪含

3、量為0.430％。在已測定的17種氨基酸中，氨基酸總含量為2.060％，其中人體必需的氨基酸有7種，占氨基酸總含量的42.526％。在已測定的15種礦物元素中，含有9種人體必需元素，其中Ca、Mg的含量較高；有害元素Hg、As、Pb及Cd的含量較低。 2.熱水浸提小薊多糖的最佳工藝為：提取溫度90℃，提取時間120min,料液比為1∶10。 3.超聲波輔助提取小薊多糖的最佳工藝參數(shù)為：功率250W，提取20min,料液比

4、為1∶15。 4.木瓜蛋白酶+Sevag法為最佳脫蛋白方法，即可較完全的脫除粗多糖中的蛋白成分，又能大大降低多糖的損失率。蛋白脫除率達(dá)96.45％。 5.經(jīng)過DEAE-52和SephadexG-200柱層析分離到CSK-A′、CSK-B′、CSK-C′、CSK-D′四種多糖組分。 6.四種精制級分純度鑒定：紫外光譜顯示在260nm、280nm處均未發(fā)現(xiàn)核酸和蛋白質(zhì)的吸收峰；醋酸薄膜電泳都得到單一色帶；Sephad

5、exG-200柱洗脫后，四種多糖的洗脫峰基本均勻?qū)ΨQ。 7.組成和結(jié)構(gòu)分析：SephadexG-200柱層析測定它們的分子量分別為20.7kD、28.6kD、148.0kD、501.2kD；氣相色譜分析結(jié)果表明CSK-A'主要有木糖、半乳糖、葡萄糖組成，質(zhì)量比為6.31∶8.52∶1.03，CSK-B′主要有鼠李糖、山梨糖和葡萄糖組成，質(zhì)量比為6.97∶1.52∶0.98，CSK-C′主要有木糖、果糖、山梨糖和葡萄糖組成，質(zhì)量比

6、為7.01∶8.93∶3.04∶1.03，CSK-D′主要有果糖、半乳糖、葡萄糖組成，質(zhì)量比為2.10∶9.85∶1.05；紅外光譜分析得知：四種組分的紅外吸收光譜均為典型的多糖吸收譜線，即在1400cm-1-1200cm-1是C-H變角振動，2930cm-1為C-H伸縮振動區(qū)，3400cm-1出現(xiàn)吸收寬峰，為O-H伸縮振動，1200cm-1-1030cm-1處有吸收峰，為C-O伸縮振動。另外1110cm-1附近有吸收峰表明各組分多糖的

7、單糖為六元雜環(huán)，1640cm-1-1600cm-1是乙酰氨基的特征峰。各組分多糖的紅外光譜圖在1075cm-1-1000cm-1處有吸收，由此可推斷該多糖為可能一種β-吡喃多糖，含有乙酰氨基團。 8.小薊多糖半純品體外抗氧化活性試驗表明： (1)CSK-B，CSK-C，CSK-D對H2O2/Fe2+體系通過Fenton反應(yīng)產(chǎn)生的·OH具有清除作用，且隨加入量的增加，清除率上升，即清除率與多糖的用量存在一定的量效關(guān)系。其中

8、CSK-D的清除作用最強，1.8mL的用量即可達(dá)到67.29％，CSK-B的抑制作用次之，CSK-C雖具有一定的清除作用，但作用較弱。而CSK-A幾乎沒有清除·OH的作用。 (2)CSK-A,CSK-B，CSK-C，對Fe2+誘發(fā)卵黃脂蛋白PUFA過氧化體系具有清除作用，且隨加入量的增加，清除率上升，即清除率與多糖的用量存在一定的量效關(guān)系。其中CSK-C的清除作用最強，加入濃度為2.5mg/mL可達(dá)到53.64％，CSK-A、C

9、SK-B的清除作用次之，而CSK-D幾乎沒有清除Fe2+誘發(fā)卵黃脂蛋白PUFA過氧化體系的作用。 9.小薊粗多糖動物試驗表明： (1)小薊粗多糖能有效降低小鼠血清甘油三酯和膽固醇含量，提高小鼠血清高密度脂蛋白的含量，對小鼠的脂質(zhì)代謝具有明顯的調(diào)節(jié)作用。 (2)小薊粗多糖能夠有效抑制小鼠血清和腦組織的單胺氧化酶(MAO)活性?？梢蕴岣呤茉囆∈笱?、肝組織、腦組織中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH