低頻超聲聯(lián)合微泡輻照治療乳腺癌和療效多模態(tài)超聲評(píng)估的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本文主要從以下幾方面進(jìn)行了論述：
　　第一部分 低頻超聲輻照抑制裸鼠移植乳腺癌的參數(shù)選擇
　　目的：探討低頻超聲輻照治療裸鼠移植乳腺癌較適宜的超聲參數(shù)組合。
　　方法：用細(xì)胞移植的方法構(gòu)建裸鼠移植乳腺癌模型，30只荷瘤裸鼠根據(jù)超聲強(qiáng)度占空比的不同組合隨機(jī)分為6組(n=5)，其中第1組為對(duì)照組（“空照”組），超聲強(qiáng)度0 W/cm2、占空比0；第2～6分別為輻照組，超聲強(qiáng)度和占空比分為0.5 W/cm2、20％,1 W/c

2、m2、20％,1 W/cm2、50％，2 W/cm2、50％和2 W/cm2、100％。以預(yù)定的超聲參數(shù)組合進(jìn)行5min“空照”或輻照，觀察處理后10天內(nèi)各組裸鼠生存和瘤體生長情況，觀察結(jié)束后處死全部裸鼠，并獲取瘤體標(biāo)本。H-E染色觀察各組瘤體組織學(xué)改變情況，TUNEL染色檢測腫瘤細(xì)胞凋亡情況，并計(jì)算凋亡指數(shù)(AI)。
　　結(jié)果：①輻照后，除第6組裸鼠死亡1只外，其他裸鼠全部存活，存活裸鼠組織學(xué)差異不明顯；②處死前與輻照前比較，各

3、組裸鼠瘤體體積均不同程度增長（P＜0.01）；處死前各組瘤體組間比較，第1～4組[(2.134±0.248)cm3、(2.114±0.277)cm3、(2.063±0.192)cm3、(2.016±0.231)cm3]組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，第5、6組組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(1.704±0.209)cm3、(1.670±0.095)cm3]（P＞0.05），但第5、6組瘤體體積均明顯小于第1～4組（P＜0.01）;③隨輻照

4、劑量的增加，腫瘤細(xì)胞凋亡增多，其中以第5、6組AI最高[（17.23±0.59）％、（17.92±0.67）％]，與1～4組[(4.74±0.34)％、(7.03±0.69)％、（9.75±0.41）％、（11.83±0.66）％]比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，但第5、6組組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論：1、強(qiáng)度2 W/cm2、占空比50％和時(shí)間5min是1MHz低頻超聲輻照治療裸鼠移植乳腺癌適宜、安

5、全的治療參數(shù)組合。
　　第二部分 微泡增強(qiáng)低頻超聲空化效應(yīng)抑制裸鼠移植乳腺癌的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的：觀察低頻超聲聯(lián)合微泡輻照治療裸鼠移植乳腺癌的效果，并探討可能的機(jī)制。
　　方法：用細(xì)胞移植的方法構(gòu)建20只裸鼠移植乳腺癌模型，隨機(jī)平均分為空白對(duì)照組、單純微泡組、單純超聲組和超聲微泡組，每組5只。超聲微泡組:尾靜脈緩慢注射0.2ml SonoVue微泡的同時(shí)，對(duì)瘤體進(jìn)行1MHz的超聲輻照，超聲強(qiáng)度為2 W/cm2、占空比為

6、50％;單純超聲組：尾靜脈注射0.2ml生理鹽水的同時(shí)，對(duì)瘤體進(jìn)行與超聲微泡組相同條件的超聲輻照；單純微泡組：尾靜脈緩慢注射0.2ml SonoVue微泡的同時(shí)，對(duì)瘤體進(jìn)行空照；空白對(duì)照組：尾靜脈注射0.2ml生理鹽水的同時(shí)，對(duì)瘤體進(jìn)行空照。所有裸鼠隔天輻照或空照一次，時(shí)間5min/每次，共三次。處理結(jié)束后繼續(xù)飼養(yǎng)6天，游標(biāo)卡尺于每次輻照前和末次輻照后隔天測量流體大小，共6次，計(jì)算瘤體體積和抑瘤率(IRT)；末次測量瘤體大小后處死所有裸

7、鼠，病理學(xué)檢查組織學(xué)改變情況、腫瘤細(xì)胞凋亡和和微血管改變情況，計(jì)算并比較凋亡指數(shù)(AI)和微血管密度(MVD)。
　　結(jié)果：①超聲微泡組瘤體生長受到明顯抑制，超聲微泡組瘤體體積[(0.864±0.493)cm3]明顯小于單純超聲組[(1.666±0.131)cm3]、單純微泡組[(2.067±0.281)cm3]和空白對(duì)照組[(1.841±0.248)cm3](P＜0.01)，而超聲微泡組IRT(58.25％)明顯大于單純超聲組(

8、19.45％)和單純微泡組(10.98％)(P＜0.01)。②各組瘤體組織學(xué)改變差異不明顯，但超聲微泡組AI[(49.02±2.85)％]明顯大于單純超聲組[（11.04±0.34）％]、單純微泡組[（6.15±0.29）％]和空白對(duì)照組[（4.68±0.22）％]（P＜0.01），且MVD(3.75±0.36)明顯小于單純超聲組（6.59±0.24）、單純微泡組（10.48±0.44）和空白對(duì)照組（10.93±0.37）(P＜0.01

9、)。
　　結(jié)論：1MHZ的低頻超聲聯(lián)合微泡輻照可有效抑制裸鼠移植乳腺癌的生長，其機(jī)制可能是超聲空化效應(yīng)直接破壞腫瘤的新生血管，并導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞凋亡有關(guān)。
　　第三部 分多模態(tài)超聲評(píng)價(jià)低頻超聲聯(lián)合微泡輻照抑制乳腺癌的效果
　　目的：探討多模態(tài)超聲（包括常規(guī)超聲中的2DUS和CDFI、彈性成像中的RTE和VTQ、ABVS以及CEUS）評(píng)價(jià)低頻超聲輻照治療乳腺癌療效的效果。
　　方法：用細(xì)胞移植的方法構(gòu)建20只裸鼠移植乳

10、腺癌模型，隨機(jī)平均分為對(duì)照組和治療組，每組5只。治療組：尾靜脈緩慢注射0.2ml SonoVue微泡的同時(shí)，對(duì)瘤體進(jìn)行1MHz的超聲輻照5min，超聲強(qiáng)度為2 W/cm2、占空比為50％；對(duì)照組：尾靜脈注射0.2ml生理鹽水的同時(shí)，對(duì)瘤體進(jìn)行空照5min，所有裸鼠隔天輻照或空照一次，共三次。處理結(jié)束后繼續(xù)飼養(yǎng)6天，于首次處理前和處死前個(gè)進(jìn)行一次全面的多模態(tài)超聲檢查，完成多模態(tài)超聲檢查后處死所有裸鼠，游標(biāo)卡尺測量瘤體大小并計(jì)算體積，病理學(xué)

11、檢查組織學(xué)改變情況、腫瘤細(xì)胞凋亡和和微血管改變情況，計(jì)算并比較凋亡指數(shù)(AI)和微血管密度(MVD)。多模態(tài)超聲檢查中2DUS和ABVS觀察瘤體形態(tài)學(xué)特征，測量瘤體大小并計(jì)算瘤體體積；RTE依據(jù)彈性圖對(duì)瘤體硬度由低到高評(píng)為1～5分，VTQ檢測瘤體橫向剪切波速度(SWV)；CDFI根據(jù)血流圖對(duì)瘤體血流有少到多分為0～Ⅲ級(jí)，CEUS造影圖像實(shí)時(shí)觀察瘤體灌注情況，CEUS時(shí)間-強(qiáng)度曲線分析峰值強(qiáng)度(Peak)、達(dá)峰時(shí)間(Tp)、曲線下面積(A

12、UC)和平均通過時(shí)間(MTT)等參數(shù)。治療組輻照后所有數(shù)據(jù)與治療前、對(duì)照組處理后進(jìn)行比較，其中2DUS和ABVS末次測量結(jié)果還與游標(biāo)卡尺測量結(jié)果進(jìn)行比較。
　　結(jié)果：①治療組組織學(xué)改變不明顯，但AI[(48.71±2.38)％]明顯大于對(duì)照組[（4.77±0.26）％]（P＜0.01），且MVD（3.82±0.31）明顯小于對(duì)照組（10.59±0.64）（P＜0.01）。②治療組瘤體生長受到明顯抑制，治療組處死前2DUS測量瘤體體

13、積[（0.507±0.095）cm3]明顯小于對(duì)照組[(0.802±0.109)cm3]（P＜0.01），而2DUS測量結(jié)果與ABVS、裸鼠出死后游標(biāo)卡尺測量結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。③治療前后RTE評(píng)分均以4～5分多見，治療組處死前彈性評(píng)分與治療前、對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，但處死前VTQ測量SWV[(2.08±0.24)m/s]結(jié)果明顯小于治療前[(2.61±0.21)m/s]、對(duì)照組[(2.75±0.27

14、)m/s]（P＜0.05）。④治療前后CDFI分級(jí)均以0～Ⅱ級(jí)多見，治療組處死前血流分級(jí)與治療前、對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，但CEUS實(shí)時(shí)觀察顯示處死前治療組灌注明顯降低，時(shí)間-強(qiáng)度曲線參數(shù)中Peak和AUC[(28.70±6.75)％，[(1564.20±449.22)％s]明顯小于治療前[(54.20±6.18)％，(2954.00±702.66)％s]、對(duì)照組[(56.70±8.55)％，(2978.80±633.7