RNA干擾技術(shù)阻斷α-synuclein過表達(dá)的研究及家族性帕金森病α-synuclein基因突變分析.pdf

1、中南大學(xué)博士學(xué)位論文RNA干擾技術(shù)阻斷αsynuclein過表達(dá)的研究及家族性帕金森病αsynuclein基因突變分析姓名：陳濤申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師：唐北沙20050501效，通過RNAi封閉盤一砂，2“c據(jù)加基因達(dá)到阻斷0l—synuclein蛋白病理性聚集及細(xì)胞凋亡的目的，為開辟一條新的治療帕金森病的有效途徑奠定基礎(chǔ)。在本研究中，我們還對(duì)5個(gè)ADPD家系先證者進(jìn)行a—ls：彬“c冶砌基因突變分析，旨在迸一步了解我

2、國(guó)常染色體顯性遺傳性帕金森病a一∥““c把枷基因突變情況。第一部分口嘲懈“蚴l基因RNA干擾載體及葉synuclein—pEGFP真核細(xì)胞表達(dá)載體的構(gòu)建為構(gòu)建高效特異的d一妙胛“c把加基因RNA干擾載體，本研究采用攜帶H1肩動(dòng)子的PBSHHl質(zhì)粒，構(gòu)建4個(gè)可有效表達(dá)發(fā)夾狀RNA的特異性0【sy叫cleinpBsHHlRNA干擾載體，應(yīng)用限制性內(nèi)切酶酶切、DNA測(cè)序證實(shí)后行wjstemblot、RT_PCR檢測(cè)，篩選出針對(duì)常染色體顯性遺傳

3、性帕金森病致病基因a置妒“c，P加特異性的I礬A干擾載體psYNi—l，抑制效率達(dá)696％，并確立n，邏川“ck加基因205—226nt位點(diǎn)為干擾的有效靶位點(diǎn)。同時(shí)采用PCR法擴(kuò)增d—l矽材c膪加基因，亞克隆入pEGFP—N1質(zhì)粒，成功構(gòu)建cc—synuclein—pEGFP真核細(xì)胞表達(dá)載體。第二部分m眇刪如脅過表達(dá)誘導(dǎo)a—synucIein蛋白病理性積聚及細(xì)胞凋亡的研究為觀察a點(diǎn)炒“c彪伽過表達(dá)對(duì)細(xì)胞的影響，本研究將構(gòu)建成功的0【sy