α-synuclein和γ-synuclein結(jié)構(gòu)與功能的初步研究.pdf

1、Synuclein家族是近年來(lái)在脊椎動(dòng)物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的一個(gè)同源性較高的蛋白家族.這個(gè)蛋白家族已知包括三個(gè)成員:α-synuclein,β-synuclein和γ-synuclein.A-synuclein的突變體與罕見(jiàn)的家族性的早發(fā)性帕金森病有關(guān),而且,野生型的未突變的α-synuclein會(huì)在帕金森病,阿爾茨海默氏病和其他的一些神經(jīng)退行性疾病中發(fā)生不正常的沉積.而在散發(fā)性的帕金森病人的中樞神經(jīng)系統(tǒng),則只含有未突變的野生型α-synucle

2、in.在尚無(wú)較好思路來(lái)進(jìn)一步研究α-synuclein的生理功能以及它和兩種突變體在神經(jīng)退行性疾病過(guò)程中的作用分子機(jī)制之前,進(jìn)行蛋白結(jié)晶并解析它們的結(jié)構(gòu),近而從結(jié)構(gòu)推測(cè)它們的功能及在疾病發(fā)生中所起的作用不失為一個(gè)好的策略.我們成功的從人四月胎腦組織提取的RNA中通過(guò)RT-PCR方法獲得了α-synuclein.并把它構(gòu)建進(jìn)入pGEX-4T-1表達(dá)載體中,通過(guò)表達(dá)純化和結(jié)晶,得到了α-synuclein蛋白的晶體.同時(shí),體外獲得了存在于早

3、發(fā)性家族性帕金森病人神經(jīng)元內(nèi)的突變體之一A53T α-synuclein的cDNA克隆.人們對(duì)于γ-synuclein的生理功能和病理作用也了解甚少,我們期望從尋找它的相互作用蛋白入手,探討它是否與某種信號(hào)通路相關(guān)或者是同細(xì)胞骨架與核骨架有關(guān).為此,我們從人四月胎腦組織提取的RNA中通過(guò)RT-PCR的方法獲得了γ-synuclein的全長(zhǎng)cDNA,構(gòu)建了pGEX-4T-1-γ-synuclein表達(dá)載體并表達(dá)純化了該蛋白.我們同時(shí)提取了

4、健康腦組織蛋白,用純化好的GST-SNCG融合蛋白及GST蛋白進(jìn)行GST-PULLDOWN實(shí)驗(yàn),在SDS-PAGE凝膠電泳分析后,得到了兩條差異顯著的蛋白條帶.我們?cè)趯?duì)差異蛋白的質(zhì)譜分析后得到了兩個(gè)蛋白,分別是crystallin alphaB和AHI-1.現(xiàn)已發(fā)現(xiàn),γ-synuclein在不同組織及不同組織的良、惡性狀態(tài)之間,表達(dá)差異較大.我們猜測(cè):γ-synuclein在健康腦組織和腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤組織之間的表達(dá)差異是由CpG島的甲基化