腦不對(duì)稱BALB-c小鼠天敵應(yīng)激后血漿皮質(zhì)酮和TNF-α的變化研究.pdf

1、背景與目的：
　　腦不對(duì)稱是一個(gè)廣泛存在的生物學(xué)現(xiàn)象,主要表現(xiàn)在大腦左右兩半球在解剖結(jié)構(gòu)和生理功能上的異質(zhì)性。通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)以及臨床觀察發(fā)現(xiàn),大腦左右兩半球?qū)γ庖吖δ芫哂邢喾吹恼{(diào)節(jié)作用,而且,動(dòng)物及人類行為不對(duì)稱與免疫系統(tǒng)間也存在密切的關(guān)系。采用伸爪取食的方法來區(qū)分小鼠的利爪性是人們普遍接受的區(qū)分小鼠腦不對(duì)稱性的模型,通過該模型可以將小鼠分為:左利鼠、右利鼠和雙利鼠。新近的研究表明腦不對(duì)稱可影響細(xì)胞因子的產(chǎn)生,例如TNF-α。過去的

2、研究結(jié)果表明,天敵應(yīng)激后左利鼠的血漿IL-1β水平顯著高于右利鼠。但是,目前人們對(duì)腦不對(duì)稱小鼠在天敵應(yīng)激后機(jī)體內(nèi)(Hypothalamic-Pituitary-Adrenocortical Axis,HPA)相關(guān)的激素和細(xì)胞因子的變化情況了解的還不是很多。為此,本文在前人工作的基礎(chǔ)上開展了如下的研究:
　　1.探討急性天敵應(yīng)激和慢性天敵應(yīng)激對(duì)腦不對(duì)稱小鼠血漿皮質(zhì)酮和TNF-α濃度的影響以及與機(jī)體免疫的關(guān)系。
　　2.探討急性

3、天敵應(yīng)激后腦不對(duì)稱小鼠血漿皮質(zhì)酮和TNF-α濃度的動(dòng)態(tài)變化。
　　3.探討急性天敵應(yīng)激和慢性天敵應(yīng)激對(duì)腦不對(duì)稱小鼠左右側(cè)海馬及肝臟中糖皮質(zhì)激素受體基因水平和蛋白水平表達(dá)的變化情況及與腦不對(duì)稱的關(guān)系。
　　材料和方法:
　　健康雌性BALB/c小鼠101只,運(yùn)用伸爪取食法按伸爪50次中伸右爪的次數(shù)給每只小鼠評(píng)分,將小鼠分為左利鼠、右利鼠和雙利鼠3組。區(qū)分利爪性1w后將左利組和右利組小鼠再分為正常生理組、急性應(yīng)激組和慢性應(yīng)

4、激組。急性應(yīng)激組給予單次60min的天敵應(yīng)激,應(yīng)激之后分別于0hr,2hr,6hr,12hr處死小鼠并收集樣本,慢性應(yīng)激組連續(xù)14d每天給予60min的天敵應(yīng)激,應(yīng)激結(jié)束后立即處死收集樣本。應(yīng)激實(shí)驗(yàn)于上午9:00-11:00進(jìn)行。小鼠處死之后,用放置于冰上已抗凝的離心管收集血液,離心后取血漿用于檢測血漿皮質(zhì)酮和TNF-α含量(ELISA法);另外,在冰上迅速分離出左右側(cè)大腦皮層、左右雙側(cè)海馬、下丘腦以及肝臟,取部分組織用TRIzol?法

5、提取總RNA,另外取組織用RIPA裂解法提取總蛋白。提取的RNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA后用Real-TimePCR定量檢測糖皮質(zhì)激素受體(Glucocorticoids Receptor,GR)mRNA的水平。提取的總蛋白用Western blot檢測GR的蛋白水平。
　　結(jié)果：和結(jié)論:
　　1.腦不對(duì)稱小鼠血漿皮質(zhì)酮水平:正常生理狀況下,左利、右利鼠皮質(zhì)酮水平較低;水平相近;慢性應(yīng)激后,血漿皮質(zhì)酮水平右利鼠與對(duì)照組相比具有顯

6、著性升高(P<0.05)。急性應(yīng)激0h,2h,6h,12h后小鼠血漿中CS水平與正常對(duì)照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　2.腦不對(duì)稱小鼠血漿TNF-α水平:正常生理狀況下,左利、右利鼠TNF-α水平較低,水平相近;急性應(yīng)激后,兩組水平均顯著升高(P<0.05),而且左利鼠TNF-α水平顯著高于右利鼠(P<0.05)。急性應(yīng)激后6hr血漿TNF-α達(dá)到分泌高峰,此后呈回落趨勢(shì)。慢性應(yīng)激后,左利鼠和右利鼠血漿TNF-α水平相對(duì)于急性應(yīng)激組和

7、正常組都有顯著性升高(P<0.05)。
　　3.正常生理狀況下左利鼠左側(cè)海馬GRmRNA表達(dá)水平顯著高于右利鼠左側(cè)海馬P<0.05),左利鼠右側(cè)海馬GRmRNA水平顯著高于右利鼠右側(cè)海馬(P<0.05)。無論是左側(cè)海馬區(qū)還是右側(cè)海馬區(qū)左利鼠在急性應(yīng)激和慢性應(yīng)激之后GRmRNA都出現(xiàn)了顯著性地下調(diào)(P<0.05)。
　　4.正常生理狀況下左利鼠和右利鼠肝臟中GRmRNA表達(dá)都比較高,水平相近。急性應(yīng)激后都出現(xiàn)了顯著性下調(diào)(P<

8、0.05)。相對(duì)于正常生理組,慢性應(yīng)激后,左利鼠和右利鼠肝臟中GRmRNA表達(dá)都顯著性下調(diào)(P<0.05),但是相對(duì)于急性應(yīng)激組則沒有顯著性變化。
　　5.正常生理狀況下左利鼠和右利鼠左右兩側(cè)海馬中GR蛋白表達(dá)都比較高,水平相近。急性應(yīng)激后左利鼠左側(cè)海馬、左利鼠和右利鼠的右側(cè)海馬中GR蛋白表達(dá)均顯著下調(diào)(P<0.05)。慢性應(yīng)激后,左利鼠雙側(cè)海馬和右利鼠雙側(cè)海馬中GR蛋白都顯著性下調(diào)(P<0.05),相對(duì)于急性應(yīng)激,左利鼠右側(cè)海馬