硝普鈉對(duì)大鼠肝臟缺血再灌注損傷早期微粒體白三烯C4合成酶系及產(chǎn)物L(fēng)TC4的影響.pdf

1、一段時(shí)間的缺血是許多肝臟外科手術(shù)所必需的,尤其涉及到較大范圍的肝損傷時(shí)更是如此。在恢復(fù)高血流供應(yīng)后,肝臟遭受更進(jìn)一步的損害,加重缺血導(dǎo)致的業(yè)已存在的損傷,稱為缺血再灌注(ischemia and reperfusion,I/R)損傷。肝臟I/R損傷是一個(gè)重大臨床問題,在創(chuàng)傷、熱損傷、血容量減少、內(nèi)毒素休克、重建血管外科、肝移植和肝切除外科手術(shù)等情況下均有I/R參與其發(fā)生機(jī)制。許多實(shí)驗(yàn)顯示I/R誘發(fā)的肝損傷分兩個(gè)時(shí)期發(fā)生。在再灌注早期,內(nèi)

2、皮細(xì)胞腫脹,血管收縮,白細(xì)胞誘捕及血小板聚集在竇狀隙導(dǎo)致微循環(huán)衰竭,缺血導(dǎo)致能量缺乏,使膜轉(zhuǎn)運(yùn)失效而致細(xì)胞內(nèi)水腫,內(nèi)皮和枯否細(xì)胞發(fā)生腫脹。NO/ET平衡失調(diào)導(dǎo)致血管進(jìn)一步收縮,造成竇狀隙狹窄,隨之降低白細(xì)胞速度,白細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞接觸的頻率升高,造成白細(xì)胞停滯。停滯的白細(xì)胞盡管不能完全阻塞竇狀隙腔,卻進(jìn)一步造成肝微循環(huán)血流障礙,延長(zhǎng)缺氧時(shí)間,使這一區(qū)域在再灌注開始后仍保持缺血,進(jìn)而激活枯否細(xì)胞和中性白細(xì)胞。這些細(xì)胞產(chǎn)生炎癥細(xì)胞因子和氧起源

3、的自由基進(jìn)一步加劇肝損傷。半胱氨酰白三烯(cysteinyl leukotrienes,Cys-LTs)是一類重要的前炎癥花生四烯酸類物質(zhì),它由肝臟代謝分泌到膽汁,該作用呈ATP依賴性,其母體復(fù)合物L(fēng)TC4由肝微粒體白三烯C4合酶(leukotriene C4 synthase,LTC4S)、微粒體谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(microsomal glutathione S-transferase,mGST)2和mGST3催化LTA4和GSH結(jié)合

4、形成?，F(xiàn)已知人和鼠肝臟中均有LTC4S、mGST2和mGST3表達(dá)。有報(bào)道LTs關(guān)系到幾種肝損傷,如急性肝壞死,肝硬化和敗血癥,但有關(guān)肝臟I/R損傷與LTs關(guān)系的研究較少。有研究表明I/R損傷肝組織LTC4含量較對(duì)照組顯著升高，并伴隨肝臟水腫增強(qiáng)和血漿ALT上升。但肝臟I/R損傷過程中用GST2和mGST3基因和蛋白表達(dá)有無變化，肝臟I/RR損傷是否影響肝微粒體LTC、合成酶系的活性尚不得而知。
　　Larfars等研究首次表明花

5、生四烯酸代謝產(chǎn)物L(fēng)TB4, LTC4和LTD4通過作用離體人多形核白細(xì)胞（PMN）表面受體，以G蛋白和[Ca2+]i依賴激活PMN釋放NO。NO供體硝普鈉（0.05mmo1/L,1mmol/L）灌流減弱了LTD4對(duì)膽汁流量、膽汁酸分泌及門靜脈流量的影響，而LTD4對(duì)葡萄糖排出的作用未受影響。給予LTD4后門脈流量減少和膽汁量減少之間密切相關(guān)，當(dāng)給予SNP后相關(guān)性減弱。此外LTB4濃度依賴性方式減弱了肝細(xì)胞NO合成，當(dāng)肝細(xì)胞被細(xì)胞因子聯(lián)合

6、刺激或IL-1單獨(dú)刺激時(shí)，降低的NO2-合成同降低的iNOS mRNA相關(guān)聯(lián)顯示iNOS的誘導(dǎo)被抑制，提示類花生酸類物質(zhì)能調(diào)節(jié)離體肝細(xì)胞NO的合成。過去20多年的研究顯示NO是心血管、神經(jīng)和免疫系統(tǒng)主要的信息分子，參與了機(jī)體的多項(xiàng)生理和病理過程。體內(nèi)肝血管內(nèi)皮、血小板、神經(jīng)末稍、肥大細(xì)胞和枯否細(xì)胞在內(nèi)毒素、I/R損傷及循環(huán)性休克等刺激下可產(chǎn)生NO，其中起作用的自體生物活性物質(zhì)有組織胺、血管活性腸膚、腺苷、ATP, 5-HT, P物質(zhì)、緩

7、激膚和降鈣素基因相關(guān)膚等。NO在肝I/R損傷中的作用各家報(bào)道不一。有關(guān)NO是否及如何在肝臟I/R損傷早期影響微粒體谷骯甘膚S轉(zhuǎn)移酶超家族成員(MAPEG)中LTC4合成酶(LTC4S, mGST2和mGST3)基因和蛋白表達(dá)、活性及其產(chǎn)物L(fēng)TC4含量，其作用的分子機(jī)制如何尚未見報(bào)道。
　　本研究采用Pringle's法制作大鼠肝臟部分(70％左右)I/R損傷模型，觀察了肝臟I/R損傷過程中微粒體LTC4合成酶基因和蛋白表達(dá)、酶活性