CD147及RECK在系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病機(jī)制及治療中的作用.pdf

1、一、研究背景 系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)是一種多系統(tǒng)受累的自身免疫病，主要發(fā)生于育齡期婦女，病變累及包括關(guān)節(jié)肌肉、皮膚、腎臟等在內(nèi)的多個(gè)系統(tǒng)的器官，嚴(yán)重影響人體健康。SLE的病因和發(fā)病機(jī)制迄今尚未完全明了，目前認(rèn)為是具有遺傳異質(zhì)性的個(gè)體在環(huán)境和性激素等因素的相互影響及共同作用下，出現(xiàn)免疫調(diào)節(jié)功能紊亂，導(dǎo)致SLE的發(fā)生。 近20年來(lái)，SLE的預(yù)后已經(jīng)大為改善，目前其1

2、0年生存率可達(dá)90％以上。性別、年齡、疾病嚴(yán)重程度、治療方案等因素均能影響SLE患者生存率。早期干預(yù)及控制疾病損傷與提高對(duì)高血壓、感染及其它臨床風(fēng)險(xiǎn)的控制在改善患者預(yù)后方面卓有成效。但狼瘡血管炎所造成的器官損傷仍然嚴(yán)重影響患者預(yù)后。因此，深入了解狼瘡血管炎的發(fā)病機(jī)制及控制方法有助于尋找確切有效的治療手段。 血管炎是SLE的基本病變之一，臨床表現(xiàn)多種多樣，可發(fā)生于病程任何階段。在美國(guó)和加拿大多數(shù)風(fēng)濕病專家所選出的狼瘡活動(dòng)性評(píng)價(jià)項(xiàng)目

3、、英國(guó)狼瘡評(píng)估小組及Liang提出的24項(xiàng)判斷狼瘡活動(dòng)的指標(biāo)中，血管炎均是判斷SLE活動(dòng)的重要指標(biāo)。SLE血管炎可累及多個(gè)系統(tǒng)的臟器而嚴(yán)重威脅患者生命：累及肺最終可導(dǎo)致肺動(dòng)脈高壓；累及消化系統(tǒng)可致急性胰腺炎，亦可導(dǎo)致食道、胃、小腸、結(jié)腸組織出血、壞死或穿孔；累及中樞神經(jīng)系統(tǒng)可因血管炎引起腦梗塞或腦出血而致患者構(gòu)語(yǔ)障礙、偏癱甚至出現(xiàn)癲癇大發(fā)作的狼瘡腦病危象。 基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase 9

4、，MMP-9)是基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)家族成員，其主要功能是降解細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular cell matrix，ECM)，在血管炎的發(fā)生中起到重要作用。越來(lái)越多的證據(jù)表明，MMP-9通過(guò)降解血管基底膜的主要成分，使內(nèi)皮細(xì)胞通透性增加，炎性細(xì)胞易于侵入血管壁，引發(fā)炎癥反應(yīng)，從而參與系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病的多個(gè)環(huán)節(jié)。已有研究表明，SLE患者PBMCs分泌MMP-9的能力增強(qiáng)，但是關(guān)于SLE患者血清MMP-9濃度變化及其與SL

5、E病情活動(dòng)關(guān)系的研究結(jié)論并不一致，有學(xué)者研究認(rèn)為血清MMP-9水平的降低是疾病活動(dòng)的標(biāo)志，也有研究結(jié)果顯示活動(dòng)期患者M(jìn)MP-9水平升高。Meta分析是一種對(duì)已有具有相同研究目的的多個(gè)獨(dú)立研究資料結(jié)果進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)和定量合并分析的統(tǒng)計(jì)分析方法。因此我們對(duì)公開(kāi)發(fā)表的有關(guān)SLE患者血清MMP-9濃度的研究進(jìn)行了Meta分析，以期進(jìn)一步明確SLE患者血清MMP-9濃度變化情況及其與病情活動(dòng)的關(guān)系。 MMP-9可通過(guò)降解血管基底膜的主要成分

6、，直接破壞血管內(nèi)皮屏障，使內(nèi)皮細(xì)胞通透性增加，有助于免疫細(xì)胞黏附于血管內(nèi)皮分泌炎性細(xì)胞因子和MMP-9，進(jìn)一步促進(jìn)炎癥發(fā)展；也可與TNF-α、IL-1等在SLE發(fā)病中作用已證實(shí)的細(xì)胞因子相互作用放大免疫介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)；此外，它可以降解腎小球基底膜，促進(jìn)SLE腎損害。過(guò)度產(chǎn)生的MMP-9可加劇內(nèi)皮細(xì)胞損傷，促進(jìn)炎癥細(xì)胞穿過(guò)基底膜，最終導(dǎo)致血管炎的發(fā)生。因此，對(duì)MMP-9的抑制可防止血管炎所致SLE器官損傷。 目前，已有數(shù)種人工MM

7、Ps抑制劑初步用于一些腫瘤和自身免疫病的治療。因?yàn)槠鋰?yán)重的骨骼肌毒性或關(guān)節(jié)毒性，臨床實(shí)驗(yàn)效果欠佳，應(yīng)用受限。因此，對(duì)新的MMPs抑制方法的探討十分必要。 CD147為免疫球蛋白超家族(Immunoglobulin Superfamily，IgSF)成員，曾被命名為腫瘤細(xì)胞來(lái)源的膠原酶刺激因子(tumor cell-derived collagenase stimulatory factor，TCSF)、細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因

8、子(Extracellular matrix metalloproteinases inducer，EMMPRIN)、人白細(xì)胞活化抗原M6及基礎(chǔ)免疫球蛋白(basic immunoglobulin，basigin)等，能誘導(dǎo)基質(zhì)金屬蛋白酶在多種細(xì)胞表面的表達(dá)和活化，參與細(xì)胞之間、細(xì)胞與基質(zhì)之間的相互作用，在腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移及一些自身免疫病的發(fā)生發(fā)展中起到重要作用。 RECK(reversion-inducing cysteine

9、-rich protein with Kazal motifS)，是一種新的MMPs抑制劑，其分子量約為110kD，是膜表面錨定糖蛋白。它含有表皮生長(zhǎng)因子(epidermal growth factor，EGF)樣重復(fù)序列以及絲氨酸蛋白酶抑制劑樣區(qū)域。RECK可抑制MMPs的分泌，其下調(diào)被認(rèn)為與腫瘤血管生成和腫瘤浸潤(rùn)生長(zhǎng)有關(guān)，作用機(jī)制未明。RECK在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者滑膜中的表達(dá)明顯低于骨關(guān)節(jié)炎和外傷關(guān)節(jié)炎患者，但關(guān)于RECK在系統(tǒng)性紅斑

10、狼瘡中的研究，至今尚未見(jiàn)報(bào)道。 二、目的評(píng)價(jià): SLE患者血清MMP-9濃度的變化及其與病情活動(dòng)性關(guān)系；檢測(cè)SLE患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)CD147、RECK的表達(dá)，分析及其與MMP-9分泌能力及患者臨床特點(diǎn)的相關(guān)性；探討CD147和RECK在系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病中的作用及抗CD147單抗在治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡中的價(jià)值。 三、研究對(duì)象和方

11、法 (一)研究對(duì)象1.國(guó)內(nèi)外公開(kāi)發(fā)表的關(guān)于SLE患者血清濃度變化及其與病情活動(dòng)關(guān)系的文獻(xiàn)； 2.SLE患者69例，為2006年7月至2007年3月在山東省立醫(yī)院風(fēng)濕免疫科門(mén)診就診或病房住院的患者； 3.健康志愿者23例，為2006年7月至2007年3月山東省立醫(yī)院查體中心健康查體者。 (二)實(shí)驗(yàn)方法1.對(duì)搜索出來(lái)的文獻(xiàn)進(jìn)行嚴(yán)格篩選； 2.密度梯度離心法分離PBMCs； 3.用流式細(xì)胞分析術(shù)

12、檢測(cè)CD147的表達(dá)； 4.RT-PCR法檢測(cè)RECK mRNA和MMP-9 mRNA的表達(dá)； 5.Western Blotting法檢測(cè)RECK蛋白的表達(dá)； 6.ELISA法檢測(cè)血清及細(xì)胞培養(yǎng)液上清中MMP-9的濃度。 (三)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理1.對(duì)所篩選文獻(xiàn)進(jìn)行Meta分析； 2.使用t檢驗(yàn)比較SLE患者和健康對(duì)照組各指標(biāo)差異； 3.對(duì)SLE患者PBMCs CD147、RECK、MMP-9的表

13、達(dá)、MMP-9的分泌、血清MMP-9濃度及臨床特點(diǎn)進(jìn)行Pearson相關(guān)分析； 4.使用2×2析因?qū)嶒?yàn)方差分析，判斷抗CD147單抗對(duì)PBMCs RECK和MMP-9的表達(dá)及MMP-9分泌的作用； 5.P＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 四、結(jié)論及意義 (一)Meta分析結(jié)果顯示SLE患者血清MMP-9濃度與健康對(duì)照并無(wú)顯著性差異，活動(dòng)期SLE患者血清MMP-9濃度與非活動(dòng)期患者亦無(wú)顯著性差異；血清MMP-9

14、濃度不足以協(xié)助診斷SLE，亦不足以用作判斷SLE患者的病情活動(dòng)性的指標(biāo)； (二)與健康對(duì)照相比，SLE患者PBMCs CD147表達(dá)升高、RECK蛋白表達(dá)降低、RECK mRNA表達(dá)降低、MMP-9 mRNA表達(dá)升高、分泌MMP-9的能力升高； (三)出現(xiàn)口腔潰瘍、腎損傷或血清抗心磷脂抗體滴度異常的SLE患者與不出現(xiàn)上述各項(xiàng)表現(xiàn)的SLE患者相比，其CD147表達(dá)更高、RECK蛋白的表達(dá)更低、分泌MMP-9的能力更強(qiáng)，更容

15、易出現(xiàn)血管炎而引起嚴(yán)重的器官損傷，臨床上應(yīng)予以充分重視： (四)SLE患者PBMCs CD147的表達(dá)與病情活動(dòng)正相關(guān)，可用于判斷SLE病情及治療效果； (五)SLE患者PBMCs RECK蛋白表達(dá)與疾病損傷負(fù)相關(guān)，可用于判斷疾病損傷程度及預(yù)后，指導(dǎo)治療； (六)SLE患者PBMCs MMP-9 mRNA表達(dá)與病情活動(dòng)正相關(guān)，與疾病損傷正相關(guān)，可用于判斷病情及預(yù)后； (七)SLE患者PBMCs分泌MMP-

16、9能力與病情活動(dòng)正相關(guān)，可用于協(xié)助判斷SLE病情及治療效果； (八)SLE患者血清MMP-9濃度與健康對(duì)照無(wú)區(qū)別，此濃度與病情活動(dòng)及預(yù)后均無(wú)明顯相關(guān)，不能用于判斷病情活動(dòng)及預(yù)后； (九)SLE患者PBMCs表面高表達(dá)的CD147對(duì)RECK蛋白的表達(dá)有抑制作用，可刺激MMP-9的分泌增多，在SLE血管炎所致?lián)p傷中起到重要作用； (一0)SLE患者PBMCs RECK蛋白表達(dá)受抑與分泌MMP-9的增多有關(guān)，增加其表達(dá)