蛋白折疊液相色譜法中包涵體的堿溶法.pdf

1、本文包括五個(gè)章節(jié)。首先，用稀堿溶液對(duì)重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(rhG-CSF)包涵體進(jìn)行了溶解，并對(duì)條件進(jìn)行了優(yōu)化；然后用蛋白折疊液相色譜法(PFLC)，包括陰離子交換色譜、金屬離子親和色譜和疏水色譜對(duì)rhG-CSF進(jìn)行復(fù)性，提高了rhG-CSF在不同色譜模式下的質(zhì)量回收率。還用堿性溶液液對(duì)重組人干細(xì)胞因子(rhG-CSF)包涵體進(jìn)行了溶解，并用強(qiáng)陰離子交換色譜法對(duì)其進(jìn)行純化及復(fù)性。 1.重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(rhG-CSF

2、)包涵體堿液溶解優(yōu)化系統(tǒng)研究了rhG-CSF包涵體的溶解條件，包括pH值、脲濃度、氫氧化鈉濃度、溶解時(shí)間等，確定用含2.0mol·L-1Urea、100mmol·L-1Tirs的0.10mol·L-1NaOH溶液作為rhG-CSF包涵體的溶解劑。對(duì)用堿溶液作為rhG-CSF包涵體的溶解劑與用8.0mol·L-1脲溶解包涵體的效果進(jìn)行了比較，結(jié)果顯示用堿液抽提可以獲得純度和濃度較高的抽提液。用丙酮沉淀蛋白對(duì)rhG-CSF脲溶抽提液進(jìn)行再次

3、純化，純化后堿液抽提液的純度可以顯著提高。 2.蛋白折疊液相色譜法(PFLC)復(fù)性重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(rhG-CSF)用PFLC純化及同時(shí)復(fù)性rhG-CSF可得到如下的結(jié)果：(1)用弱陰離子交換WAX對(duì)堿溶的rhG-CSF分離純化及復(fù)性，一步純化的純度可以得到89.9％，比活性為6.3×107IU·mg-1，質(zhì)量回收率為73.0％。(2)先采用排阻色譜柱(Superdex30)對(duì)rhG-CSF進(jìn)行初純化后用簡(jiǎn)易弱陰離子交換

4、柱最終可以得到純度96.5％，比活性為8.4×107IU·mg-1的目標(biāo)組分，質(zhì)量回收率可以達(dá)到71.5％。(3)用SAX對(duì)堿溶的rhG-CSF分離純化及復(fù)性，純化后一步rhG-CSF純度達(dá)到97.8％，比活性為6.2×107IU·mg-1，質(zhì)量回收率為58％。(4)用IMAC對(duì)堿溶的rhG-CSF進(jìn)行分離純化及復(fù)性，可以得到純度為95.6％，比活性為8.6×107IU·mg-1的rhG-CSF，色譜過(guò)程中的質(zhì)量回收率為76.9％。(5

5、)用HIC對(duì)堿溶的rhG-CSF分離純化及復(fù)性，一步純化后rhG-CSF純度達(dá)到98.2％，比活性為7.6×107IU·mg-1，質(zhì)量回收率為45.5％。與常的用8.0mol·L-1的脲溶解包涵體的方法相比較，堿溶法在以上各色譜模式下的質(zhì)量回收率都有明顯的提高。 3.重組人干細(xì)胞因子(rhSCF)包涵體溶解、純化及復(fù)性。用與溶解rhG-CSF包涵體類似的堿液對(duì)rhSCF包涵體進(jìn)行溶解，同時(shí)為了比較，也用8.0mol·L-1脲溶液