液相色譜法在醫(yī)學(xué)臨床中的應(yīng)用

1、反相高效液相色譜法在醫(yī)學(xué)臨床中的應(yīng)用引言反向高效液相色譜法是色譜中的一種特種技術(shù)。應(yīng)用本法研究藥物在正常人體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)，具有簡便，迅速，準(zhǔn)確等特點(diǎn)。RPHPLCUV的分析檢測方法，該方法不需要特殊的設(shè)備，而且分析方法的穩(wěn)定性好，精密度高，時(shí)間段，過程簡單，可以作為藥物定量分析方法。自從反相高效液相色譜法應(yīng)用以來，有關(guān)此理論和實(shí)際應(yīng)用的文獻(xiàn)已經(jīng)大量出版。目前，反相高效液相色譜法已經(jīng)為許多實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)手段。理論概要建立反相高效液相色譜法測定

2、人體內(nèi)某部位藥物濃度。化合物堅(jiān)持扭轉(zhuǎn)高水流動(dòng)相色譜法柱喝反相高效液相色譜法列高有機(jī)流動(dòng)相洗脫。在反相高效液相色譜法或何物分離的基礎(chǔ)上他們的疏水性。肽可以分開運(yùn)行的有機(jī)溶劑的線性漸變。研究運(yùn)行60╱60梯度chromatographing未知時(shí)。60╱60梯度，梯度開始接近100％的水和坡道在60分鐘內(nèi)以60％的有機(jī)溶劑。大部分肽﹙長度在10至30個(gè)氨基酸殘基﹚洗脫時(shí)間梯度達(dá)到30％的有機(jī)。醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用1.用藥后的房水進(jìn)行定量測量：眼內(nèi)藥

3、代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)：雙眼滴入眼液，將獲取的房水用反相高效液相色譜法進(jìn)行定量測量。結(jié)果滴眼后不同時(shí)間測定的房水中的藥物濃度不同，實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示局部點(diǎn)眼獲得的房水濃度低于對大多數(shù)真菌的最低抑菌濃度說明單獨(dú)點(diǎn)眼效果不好。所以應(yīng)配合全身用藥，改進(jìn)用藥途徑增加眼內(nèi)穿透力，以及增加點(diǎn)眼次數(shù)來克服此弊端。因此頻繁點(diǎn)眼也是增加眼內(nèi)穿透性，縮短病程的重要手段。病例病程較長滴眼次數(shù)過少可能事原因之一。2.測量人體組織液中藥物濃度：本研究采用乙酸乙酯直接提取血漿樣品

4、，操作簡便，提取后樣品中雜質(zhì)干擾少，各藥物的萃取回收率高，均在75%以上，且通過有機(jī)溶劑的提取和濃縮，測定的靈敏度進(jìn)一步提高。由于乙酸乙酯比重較輕，與血漿混合后不易乳化，且液面處于上層，所以實(shí)驗(yàn)操作更方便。在進(jìn)行流動(dòng)相條件篩選時(shí)，考察不同配比的分離效果，發(fā)現(xiàn)在甲醇：水﹙65:35﹚時(shí)，各色譜峰及內(nèi)標(biāo)間分離效果好，且峰形尖銳，柱效高，完成一次測定只需15min。㏎選擇230nm波長是經(jīng)過分析發(fā)現(xiàn)目標(biāo)成分在230nm紫外吸收系數(shù)均比較大，可

5、以提高靈敏度。由于本方法流動(dòng)相中無緩沖鹽和改性試劑，因此測試過程中平衡和沖洗色譜系統(tǒng)的時(shí)間比較短，有利于提高測定效果，更合適臨床應(yīng)用。3.藥物腹腔注射在家兔房水中的藥代動(dòng)力學(xué)研究：測定腹腔注射藥物后不同時(shí)間家兔房水中的質(zhì)量濃度，計(jì)算其藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，研究藥代動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)。關(guān)于樣品的處理和流動(dòng)相選擇，以甲醇處理樣品和選擇甲醇：水：磷酸緩沖液或甲醇：水為流動(dòng)相的報(bào)道較多。也有選用高氯酸處理血樣和甲醇：水：冰醋酸為流動(dòng)相的報(bào)道。我們采用高氯酸沉

6、淀放水中的微量蛋白，一甲醇：水：冰醋酸=35:65:0.2為流動(dòng)相，色譜柱為DiamonsilC18不銹鋼柱，在波長為250nm紫外光下對腹腔注射藥物量濃度的測定。通過高氯酸空白，防水空白和房水溶解藥物標(biāo)準(zhǔn)品對照測定，以及回收率測定為87.60％，日內(nèi)RSD為4.0％，日間RSD為5.32％，無其他峰干擾。結(jié)果表明，本方法具有特異，靈敏，快速等優(yōu)點(diǎn)，使用于對房水藥物質(zhì)量濃度的測量。4.藥物在玻璃體內(nèi)注射的藥代動(dòng)力學(xué)研究：取玻璃體樣品，用

7、反相高效液相色譜法測定玻璃體腔內(nèi)N質(zhì)量濃度。用DAS軟件計(jì)算主要的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變的治療主要是通過手術(shù)促使增生性病變的視網(wǎng)膜復(fù)位，但仍王仁杰張亞超9.血漿同型半胱氨酸高效液相色譜法測定余意君邵姣梅張帆嚴(yán)江濤汪道文10反向高效液相色譜法測定葒草中原兒茶酸的含量周雯，劉麗娜，蘭燕宇，王愛民，李勇軍，何迅，王永林11反向高效液相色譜測定法同時(shí)測定人血漿中5種鎮(zhèn)靜催眠藥濃度梁湘輝1，戴智勇2，劉文恩1(中南大學(xué)湘雅醫(yī)院1檢

8、驗(yàn)科；2藥劑科，長沙410008)12.反相高效液相色譜法測定色鹽桿菌新種ST307的DNAGCt001％含量崔春曉1，李鵬飛2，曹文瑞2，戴美學(xué)1，夏志潔”13.紅棗環(huán)磷酸腺苷(cAMP)的提取工藝米東，王瑛，李明潤(天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所，天津300020)14.葛根素腹腔注射在家兔房水中的藥代動(dòng)力學(xué)研究鄧新國!胡世興!張清炯!張曉慧!鐘國平!湯麗芬!吳玨珩15.反相高效液相色譜法分析甲錠反應(yīng)液中甲錠含量文介榮(湖南省桃江縣第一中學(xué)，