載脂蛋白E、溶酶體神經(jīng)氨酸酶、保護(hù)蛋白-組織蛋白酶A和β-半乳糖苷酶基因缺乏小鼠耳形態(tài)和聽功能改變初步研究.pdf

1、第一章載脂蛋白E基因缺乏小鼠耳蝸形態(tài)和功能改變;目的:以往流行病學(xué)調(diào)查、臨床病例觀察和實(shí)驗(yàn)研究提示高脂血癥與聽力損害之間可能存在一定的聯(lián)系,但病理機(jī)制均是推測(cè)性的,缺少系統(tǒng)的心血管、耳蝸及聽功能損害的證據(jù).為此,我們采用引起血脂代謝異常的遺傳工程小鼠,確定高脂血癥和動(dòng)脈粥樣硬化是否存在耳蝸形態(tài)和聽覺功能的損害以及聽功能損害與血脂、動(dòng)脈粥樣硬化和動(dòng)脈內(nèi)皮依賴性血管擴(kuò)張功能之間的關(guān)系,為進(jìn)一步認(rèn)識(shí)脂代謝異常致聾的發(fā)病機(jī)理及其有效的防治提供理

2、論依據(jù).方法自發(fā)高脂血癥和動(dòng)脈粥樣硬化的動(dòng)物模型,載脂蛋白E基因敲除(apoE knockout,ApoE-KO)小鼠,在10-12周齡分為正常飲食和高脂飲食兩組,給高脂飲食14周,相同遺傳背景的C57BL/6J小鼠作對(duì)照.通過(guò)先進(jìn)的離體血管內(nèi)皮依賴性擴(kuò)張功能測(cè)試,主動(dòng)脈粥樣硬化形態(tài)和定量分析,短聲(click)和短純音(tone pips 8 kHz,16 kHz和32 kHz)誘發(fā)的聽覺腦干反應(yīng)(ABR)聽閾測(cè)試,全耳蝸連續(xù)切片、基

3、底膜鋪片和毛細(xì)胞計(jì)數(shù),一氧化氧合酶(NOS)免疫組化染色,結(jié)合聽閾與血漿總膽固醇和動(dòng)脈粥樣硬化損害的相關(guān)分析,觀察正常和高脂飲食的ApoE-KO小鼠耳蝸形態(tài)和功能改變,以及聽力損害與血脂水平和動(dòng)脈粥樣硬化程度的相關(guān)性.第二章溶酶體神經(jīng)氨酸酶、保護(hù)蛋白/組織蛋白酶A和β-半乳糖苷酶基因缺乏小鼠耳形態(tài)和聽功能改變;目的:溶酶體貯積疾病包括一大類由于溶酶體水解酶缺乏引起的遺傳代謝性神經(jīng)變性疾病,其中部分可致耳聾.唾液酸沉積癥、半乳糖唾液酸沉積

4、癥和GM1-神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥是因神經(jīng)氨酸酶、保護(hù)蛋白/組織蛋白酶A和β-半乳糖唾液酸酶單一或結(jié)合性缺乏所致.這三種酶基因敲除的小鼠模型在全身大多數(shù)組織和器官的臨床、生物化學(xué)和病理學(xué)特征已被確定,而它們是否也存在聽力和耳形態(tài)改變目前不清楚.為此,我們確定和比較這三種小鼠模型耳形態(tài)和聽功能的損害及其程度,探討這些疾病致聾的病理生理學(xué)機(jī)制,為該類遺傳性疾病的防治提供理論依據(jù).方法分別利用小鼠溶酶體神經(jīng)氨酸酶基因(Neu1)、保護(hù)蛋白/組織蛋白