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1、該工作的主要結(jié)果如下:1.成功地從分娩后大鼠的腦和子宮組織中,利用RT-PCR的方法克隆得到OTR的cDNA編碼區(qū)全序列;應(yīng)用DNA序列比較軟件MegAlign對(duì)腦和子宮中的OTR的cDNA編碼區(qū)全序列進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)來(lái)源于腦和子宮組織的OTR cDNA編碼區(qū)序列是完全一致的,且大小均為1167bp.2.將OTR cDNA編碼區(qū)全長(zhǎng)亞克隆至pET-28-α載體、將OTR cDNA編碼區(qū)5端420bp、5端120bp和3端168bp的片段分
2、別亞克隆至pGEX-4T-3載體,然后將這些重組質(zhì)粒在大腸桿菌BL21內(nèi)進(jìn)行表達(dá),發(fā)現(xiàn)只有5端120bp,即編碼OTR氨基端胞外域的基因片段能夠在大腸桿菌內(nèi)高效表達(dá).3.優(yōu)化誘導(dǎo)表達(dá)的條件,得到大量水溶性的OTR氨基端胞外域與GST的融合蛋白(GST-OTRN<,40>),利用Sepharose 4B柱親和層析純化了此融合蛋白.4.將OTR cDNA編碼區(qū)全長(zhǎng)亞克隆至真核表達(dá)載體pcDNA3.1(+)、pcDNA3.1(+)-FLAG和
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