蛹蟲草SOD基因全長(zhǎng)cDNA的克隆及在大腸桿菌和煙草中的表達(dá).pdf_第1頁(yè)
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1、根據(jù)GenBank中所登錄的各種真菌銅鋅型超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)與錳型超氧化物歧化酶(Mn-SOD)基因的氨基酸序列及核苷酸序列,設(shè)計(jì)一對(duì)簡(jiǎn)并引物,RT-PCR擴(kuò)增蛹蟲草(Cordyceps militaris)兩種SOD基因中間片段.利用RACE-PCR的方法得到兩種SOD基因的3'末端和5'末端.序列拼接獲得兩種SOD(CuZnSOD和Mn-SOD)基因的全長(zhǎng)cDNA.通過(guò)RT-PCR,擴(kuò)增蛹蟲草CuZn-SOD基因和M

2、n-SOD基因完整的編碼區(qū),將產(chǎn)物用BamHI和SalI進(jìn)行雙酶切,連入用同樣酶切的pGEX-4T3載體上,構(gòu)建了原核表達(dá)載體pGEX-sod19和pGEX-sod14.將原核表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)菌株,進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),經(jīng)SDS-PAGE電泳,發(fā)現(xiàn)兩個(gè)載體都表達(dá)出了相應(yīng)的融合蛋白.利用pBI121載體,將CuZn-SOD和Mn-SOD基因分別構(gòu)建植物表達(dá)載體pBIsod14和pGEX-sod19,轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌LBA4404中

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