骨髓間質(zhì)干細胞移植對單純收縮期高血壓大鼠主動脈重構(gòu)及靶器官保護的實驗研究.pdf

1、目的：通過對骨髓間質(zhì)干細胞移植對單純收縮期高血壓和自發(fā)性高血壓大鼠主動脈、心臟及腎臟的結(jié)構(gòu)及功能影響的研究，探討MSCs對高血壓造成的大動脈順應性降低、靶器官損害是否具有改善作用及可能的作用機制，從而為高血壓特別是單純收縮期高血壓的治療提供新的思路。 方法：采用密度離心法分離大鼠長骨間質(zhì)干細胞并建立穩(wěn)定的體外培養(yǎng)體系，對所分離細胞進行純化、鑒定及標記。采用ISH大鼠及SHR作為研究對象，采用左心室直接注射干細胞的方法進行干預移植

2、，4周后檢測實驗動物有創(chuàng)血壓、脈博傳導速度、心臟壓力-容積變化，評價動脈順應性及心功能狀態(tài)。摘取主動脈、心臟及腎臟組織分別進行病理學檢查及蛋白分析。采用三聯(lián)染色法分析組織中彈性纖維、膠原纖維比例；采用天狼猩紅染色后用偏振光顯微鏡檢測動脈壁中Ⅰ、Ⅲ型膠原的水平及比例變化，VonKossa染色分析動脈鈣化程度。采用免疫組織化學的方法檢測動脈壁中血紅素加氧酶，纖維粘連蛋白的表達水平。應用蛋白免疫印跡法檢測不同組織中骨橋蛋白的表達水平。采用原子

3、吸收光譜法測定鈣化組織中鈣含量。 結(jié)果：1、MSCs對主動脈的影響：ISH大鼠接受MSCs干預后動脈壁中彈力纖維的絕對含量與對照組相比沒有達到統(tǒng)計學顯著性；而兩組間彈力/膠原纖維比值存在統(tǒng)計學差異，MSCs干預高于對照組(P＜0.01)。細胞外基質(zhì)成分比例發(fā)生變化的同時還伴有基質(zhì)形態(tài)及排列的變化，MSCs干預組彈力纖維保持固有形狀，與膠原纖維結(jié)合緊密。MSCs植入促進局部動脈組織中血紅素加氧酶及纖維粘連蛋白的表達(P＜0.05)

4、。MSCs通過影響動脈壁中骨橋蛋白表達水平來拮抗主動脈鈣化的發(fā)生，降低組織局部鈣含量(P＜0.01)。上述動脈結(jié)構(gòu)的改變伴有動脈順應性的改變。MSCs干預組動物脈搏波傳導速度為178.6526±18.54cm/ms，明顯低于對照組(264.8546±25.3510)，這種變化具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。但SHR效果不明顯。2、MSCs對心臟的影響：MSCs干預能夠使大鼠心臟順應性明顯優(yōu)于未干預組(P＜0.05)，膠原容積分數(shù)及Ⅰ型膠

5、原含量與未干預組相比也明顯降低；同時MSCs還促進心臟局部HO-1的表達(P＜0.05)。MSCs移植并不增加心室肥厚指數(shù)(LVMass)，但可以增加舒張末期心臟容積/體重，改善心臟向心性肥厚。3、MSCs對腎臟的影響：MSCs干預可以減低高血壓大鼠腎臟活動性損傷的發(fā)生率，降低局部膠原含量，減輕腎小管損傷；同時促進腎組織骨橋蛋白及血紅素加氧酶的表達。結(jié)論：MSCs移植通過改善細胞外基質(zhì)成分的構(gòu)成比例，促進基質(zhì)成分與細胞成分的連接來逆轉(zhuǎn)血

6、管重構(gòu)的過程，部分抑制鈣在動脈壁中的沉積過程，這種動脈結(jié)構(gòu)的恢復并伴有動脈順應性的改善，對于SHR這種作用效果并不明顯。在心臟定居的MSCs能夠減少高血壓大鼠心臟膠原的沉積，調(diào)節(jié)膠原構(gòu)成比例，從而改善心臟的舒張功能，其抗心臟纖維化作用可能是通過促進OPN及HO生理作用的發(fā)揮來實現(xiàn)的。MSCs對于高血壓大鼠腎臟同樣具有一定的保護作用。MSCs能夠修復腎小球及腎小管間質(zhì)纖維化，減少腎臟組織中OPN的表達水平，增加HO表達，提高有效濾過腎單位