骨髓間質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)單純收縮期高血壓大鼠主動(dòng)脈重構(gòu)及靶器官保護(hù)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過(guò)對(duì)骨髓間質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)單純收縮期高血壓和自發(fā)性高血壓大鼠主動(dòng)脈、心臟及腎臟的結(jié)構(gòu)及功能影響的研究，探討MSCs對(duì)高血壓造成的大動(dòng)脈順應(yīng)性降低、靶器官損害是否具有改善作用及可能的作用機(jī)制，從而為高血壓特別是單純收縮期高血壓的治療提供新的思路。 方法：采用密度離心法分離大鼠長(zhǎng)骨間質(zhì)干細(xì)胞并建立穩(wěn)定的體外培養(yǎng)體系，對(duì)所分離細(xì)胞進(jìn)行純化、鑒定及標(biāo)記。采用ISH大鼠及SHR作為研究對(duì)象，采用左心室直接注射干細(xì)胞的方法進(jìn)行干預(yù)移植

2、，4周后檢測(cè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有創(chuàng)血壓、脈博傳導(dǎo)速度、心臟壓力-容積變化，評(píng)價(jià)動(dòng)脈順應(yīng)性及心功能狀態(tài)。摘取主動(dòng)脈、心臟及腎臟組織分別進(jìn)行病理學(xué)檢查及蛋白分析。采用三聯(lián)染色法分析組織中彈性纖維、膠原纖維比例；采用天狼猩紅染色后用偏振光顯微鏡檢測(cè)動(dòng)脈壁中Ⅰ、Ⅲ型膠原的水平及比例變化，VonKossa染色分析動(dòng)脈鈣化程度。采用免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)動(dòng)脈壁中血紅素加氧酶，纖維粘連蛋白的表達(dá)水平。應(yīng)用蛋白免疫印跡法檢測(cè)不同組織中骨橋蛋白的表達(dá)水平。采用原子

3、吸收光譜法測(cè)定鈣化組織中鈣含量。 結(jié)果：1、MSCs對(duì)主動(dòng)脈的影響：ISH大鼠接受MSCs干預(yù)后動(dòng)脈壁中彈力纖維的絕對(duì)含量與對(duì)照組相比沒(méi)有達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性；而兩組間彈力/膠原纖維比值存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，MSCs干預(yù)高于對(duì)照組(P＜0.01)。細(xì)胞外基質(zhì)成分比例發(fā)生變化的同時(shí)還伴有基質(zhì)形態(tài)及排列的變化，MSCs干預(yù)組彈力纖維保持固有形狀，與膠原纖維結(jié)合緊密。MSCs植入促進(jìn)局部動(dòng)脈組織中血紅素加氧酶及纖維粘連蛋白的表達(dá)(P＜0.05)

4、。MSCs通過(guò)影響動(dòng)脈壁中骨橋蛋白表達(dá)水平來(lái)拮抗主動(dòng)脈鈣化的發(fā)生，降低組織局部鈣含量(P＜0.01)。上述動(dòng)脈結(jié)構(gòu)的改變伴有動(dòng)脈順應(yīng)性的改變。MSCs干預(yù)組動(dòng)物脈搏波傳導(dǎo)速度為178.6526±18.54cm/ms，明顯低于對(duì)照組(264.8546±25.3510)，這種變化具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。但SHR效果不明顯。2、MSCs對(duì)心臟的影響：MSCs干預(yù)能夠使大鼠心臟順應(yīng)性明顯優(yōu)于未干預(yù)組(P＜0.05)，膠原容積分?jǐn)?shù)及Ⅰ型膠

5、原含量與未干預(yù)組相比也明顯降低；同時(shí)MSCs還促進(jìn)心臟局部HO-1的表達(dá)(P＜0.05)。MSCs移植并不增加心室肥厚指數(shù)(LVMass)，但可以增加舒張末期心臟容積/體重，改善心臟向心性肥厚。3、MSCs對(duì)腎臟的影響：MSCs干預(yù)可以減低高血壓大鼠腎臟活動(dòng)性損傷的發(fā)生率，降低局部膠原含量，減輕腎小管損傷；同時(shí)促進(jìn)腎組織骨橋蛋白及血紅素加氧酶的表達(dá)。結(jié)論：MSCs移植通過(guò)改善細(xì)胞外基質(zhì)成分的構(gòu)成比例，促進(jìn)基質(zhì)成分與細(xì)胞成分的連接來(lái)逆轉(zhuǎn)血

6、管重構(gòu)的過(guò)程，部分抑制鈣在動(dòng)脈壁中的沉積過(guò)程，這種動(dòng)脈結(jié)構(gòu)的恢復(fù)并伴有動(dòng)脈順應(yīng)性的改善，對(duì)于SHR這種作用效果并不明顯。在心臟定居的MSCs能夠減少高血壓大鼠心臟膠原的沉積，調(diào)節(jié)膠原構(gòu)成比例，從而改善心臟的舒張功能，其抗心臟纖維化作用可能是通過(guò)促進(jìn)OPN及HO生理作用的發(fā)揮來(lái)實(shí)現(xiàn)的。MSCs對(duì)于高血壓大鼠腎臟同樣具有一定的保護(hù)作用。MSCs能夠修復(fù)腎小球及腎小管間質(zhì)纖維化，減少腎臟組織中OPN的表達(dá)水平，增加HO表達(dá)，提高有效濾過(guò)腎單位