骨髓間質(zhì)干細(xì)胞移植治療大鼠顱腦損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：①體外分離培養(yǎng)大鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymalstemcells，MSCs)并觀察其生物學(xué)特性；②應(yīng)用損傷腦組織勻漿在體外誘導(dǎo)MSCs向神經(jīng)組織分化；③移植MSCs治療外傷性顱腦損傷大鼠模型，觀察其治療效應(yīng)；④觀察MSCs移植對大鼠顱腦損傷后氧化應(yīng)激反應(yīng)和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶表達(dá)的影響，探討MSCs移植產(chǎn)生治療效應(yīng)的機(jī)制。 方法：①應(yīng)用全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)MSCs，觀察其生物學(xué)特性；②應(yīng)用損傷腦組織勻漿在體外誘導(dǎo)M

2、SCs分化成神經(jīng)細(xì)胞，對分化后細(xì)胞進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定；③采用Feeney自由落體方法制作大鼠外傷性顱腦損傷模型，經(jīng)頸內(nèi)動(dòng)脈移植Brdu標(biāo)記的MSCs；④采用神經(jīng)系統(tǒng)疾病嚴(yán)重程度評分法評價(jià)大鼠的神經(jīng)功能，并進(jìn)行移植后大鼠腦組織的Brdu免疫組織化學(xué)檢測；⑤分別檢測實(shí)驗(yàn)組和對照組大鼠腦組織SOD、NOS、OH-的含量以及iNOS的表達(dá)，并比較兩組的差異。 結(jié)果：①應(yīng)用貼壁篩選培養(yǎng)法體外可以培養(yǎng)出大鼠的MSCs，傳至第6代時(shí)，可

3、得到較為純化的MSCs。傳至20代左右，細(xì)胞仍能旺盛生長。MSCs在體外可長期培養(yǎng)擴(kuò)增，其生物學(xué)特性穩(wěn)定。②應(yīng)用損傷腦組織勻漿誘導(dǎo)MSCs后，細(xì)胞形態(tài)變化明顯，部分細(xì)胞出現(xiàn)突起并可見胞體呈錐樣改變，在細(xì)胞生長密集處可見突起交織成網(wǎng)。免疫細(xì)胞染色結(jié)果顯示NSE陽性表達(dá)率(23.2％±6.09％)要高于GFAP陽性表達(dá)率(14.3％±3.27％)。③經(jīng)頸動(dòng)脈移植2周后，MSCs可遷移并聚集于損傷組織區(qū)域邊緣；與對照組比較，移植治療的大鼠神經(jīng)

4、功能改善狀況較好。④與對照組相比較，實(shí)驗(yàn)組大鼠腦組織內(nèi)羥自由基的含量較低，其NOS的含量也較低，SOD的活性較高。iNOS檢測表明MSCs移植可以抑制大鼠顱腦損傷后腦組織內(nèi)iNOS的表達(dá)，表明細(xì)胞移植有保護(hù)神經(jīng)元的作用。 結(jié)論：1MSCs取材容易，易于體外培養(yǎng)，具有較強(qiáng)的自我增殖能力，經(jīng)反復(fù)傳代培養(yǎng)能夠得到較為純化的MSCs。②在損傷腦組織勻漿的作用下，MSCs能夠被誘導(dǎo)分化為神經(jīng)細(xì)胞，部分能夠表達(dá)NSE和GFAP。③MSCs經(jīng)