骨髓間質(zhì)干細胞移植治療大鼠顱腦損傷的實驗研究.pdf

1、目的：①體外分離培養(yǎng)大鼠骨髓間質(zhì)干細胞(mesenchymalstemcells，MSCs)并觀察其生物學特性；②應用損傷腦組織勻漿在體外誘導MSCs向神經(jīng)組織分化；③移植MSCs治療外傷性顱腦損傷大鼠模型，觀察其治療效應；④觀察MSCs移植對大鼠顱腦損傷后氧化應激反應和誘導型一氧化氮合酶表達的影響，探討MSCs移植產(chǎn)生治療效應的機制。 方法：①應用全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)MSCs，觀察其生物學特性；②應用損傷腦組織勻漿在體外誘導M

2、SCs分化成神經(jīng)細胞，對分化后細胞進行免疫細胞化學染色鑒定；③采用Feeney自由落體方法制作大鼠外傷性顱腦損傷模型，經(jīng)頸內(nèi)動脈移植Brdu標記的MSCs；④采用神經(jīng)系統(tǒng)疾病嚴重程度評分法評價大鼠的神經(jīng)功能，并進行移植后大鼠腦組織的Brdu免疫組織化學檢測；⑤分別檢測實驗組和對照組大鼠腦組織SOD、NOS、OH-的含量以及iNOS的表達，并比較兩組的差異。 結(jié)果：①應用貼壁篩選培養(yǎng)法體外可以培養(yǎng)出大鼠的MSCs，傳至第6代時，可

3、得到較為純化的MSCs。傳至20代左右，細胞仍能旺盛生長。MSCs在體外可長期培養(yǎng)擴增，其生物學特性穩(wěn)定。②應用損傷腦組織勻漿誘導MSCs后，細胞形態(tài)變化明顯，部分細胞出現(xiàn)突起并可見胞體呈錐樣改變，在細胞生長密集處可見突起交織成網(wǎng)。免疫細胞染色結(jié)果顯示NSE陽性表達率(23.2％±6.09％)要高于GFAP陽性表達率(14.3％±3.27％)。③經(jīng)頸動脈移植2周后，MSCs可遷移并聚集于損傷組織區(qū)域邊緣；與對照組比較，移植治療的大鼠神經(jīng)

4、功能改善狀況較好。④與對照組相比較，實驗組大鼠腦組織內(nèi)羥自由基的含量較低，其NOS的含量也較低，SOD的活性較高。iNOS檢測表明MSCs移植可以抑制大鼠顱腦損傷后腦組織內(nèi)iNOS的表達，表明細胞移植有保護神經(jīng)元的作用。 結(jié)論：1MSCs取材容易，易于體外培養(yǎng)，具有較強的自我增殖能力，經(jīng)反復傳代培養(yǎng)能夠得到較為純化的MSCs。②在損傷腦組織勻漿的作用下，MSCs能夠被誘導分化為神經(jīng)細胞，部分能夠表達NSE和GFAP。③MSCs經(jīng)