經(jīng)血管周圍移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞抑制腹主動脈瘤發(fā)展的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　腹主動脈瘤(Abdominal aortic aneurysm，AAA)是一種好發(fā)于老年男性的血管退行性疾病，一旦破裂，死亡率極高。腹主動脈瘤的形成包含了一個極為復(fù)雜的動脈壁病理性重建過程，其典型特征是細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular matrix，ECM)，尤其是彈性蛋白(Elastin，ELN)的合成和降解失調(diào)，以及血管平滑肌細(xì)胞(Vascular smooth muscle cell，VSMC)的減少。這些

2、結(jié)締組織的完整性受到破壞，導(dǎo)致動脈壁的強(qiáng)度減弱并發(fā)生擴(kuò)張。本實(shí)驗(yàn)利用Pluronic F-127作為載體，將骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone marrow mesenchymal stem cell，BMSC）移植于腹主動脈周圍，研究其對腹主動脈瘤發(fā)展的影響。
　　方法:
　　本課題組采取全骨髓貼壁的方法分離骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，并進(jìn)行體外擴(kuò)增、純化，采取流式細(xì)胞術(shù)和三系分化對細(xì)胞進(jìn)行鑒定。將實(shí)驗(yàn)動物分為三組:假手術(shù)組(SHAM)、對

3、照組(CG)、實(shí)驗(yàn)組(EG)，對照組和實(shí)驗(yàn)組均通過胰彈性蛋白酶灌注的方法建立大鼠腹主動脈瘤模型，用Ⅰ型豬胰彈力蛋白酶持續(xù)加壓灌注腎下腹主動脈，保持灌注時間30min。實(shí)驗(yàn)組在造模后將外源性BMSC和Pluronic F-127凝膠混合，均勻外敷于腹主動脈周圍。4周后獲取組織樣本，通過大體觀察和測量血管直徑觀察大鼠組織結(jié)構(gòu)的變化;通過間苯二酚染色觀察各組大鼠彈力纖維的形態(tài);通過平滑肌肌動蛋白(Alpha smooth muscle act

4、in，α-SMA)免疫組織化學(xué)染色法確定主動脈壁內(nèi)血管平滑肌細(xì)胞的存留情況;通過real-time PCR分析各組大鼠動脈壁內(nèi)基質(zhì)金屬蛋白酶-9(Matrix metalloproteinases，MMP-9)和金屬蛋白酶組織抑制劑-1(Tissue inhibitor of metalloproteinase，TIMP-1)的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　體外培養(yǎng)的細(xì)胞陽性表達(dá)CD29、90，而陰性表達(dá)CD45、34，且經(jīng)成

5、骨、成脂和成軟骨誘導(dǎo)后，茜素紅、油紅、阿辛藍(lán)染色均呈陽性，從而證實(shí)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。采用胰酶灌注法進(jìn)行造模后，腹主動脈的直徑較原來增加超過50％，符合腹主動脈瘤的診斷標(biāo)準(zhǔn)。4周后進(jìn)行各項(xiàng)檢測結(jié)果表明，經(jīng)過BMSC治療的實(shí)驗(yàn)組與對照組相比，動脈瘤的擴(kuò)張率明顯減輕（53.13±30.83％ VS139.37±27.45％，P＜0.01），提示實(shí)驗(yàn)組動脈瘤的發(fā)展受到明顯的抑制;MMP-9的mRNA相對表達(dá)水平降低（1.34±0.14

6、 VS2.40±0.14，P＜0.01），而TIMP-1的mRNA相對表達(dá)水平升高(0.76±0.18 VS0.48±0.17，P＜0.01)，提示實(shí)驗(yàn)組動脈瘤體中MMP的活性受到明顯抑制，而其組織抑制劑的活性增強(qiáng);存留的血管平滑肌細(xì)胞數(shù)量明顯增多（88.14±8.63 VS48.43±9.03個/高倍鏡，P＜0.01），提示實(shí)驗(yàn)組血管壁中較少的平滑肌細(xì)胞發(fā)生凋亡。
　　結(jié)論:
　　采用胰彈性蛋白酶灌注法可以建立穩(wěn)定的大鼠腹