骨髓增殖性腫瘤的JAK2V617F,DNMT3A,NPM1和FLT3-ITD基因突變研究.pdf

1、背景：
　　骨髓增殖性腫瘤(MPN)是一種危害人類健康的血液系統(tǒng)疾病。主要分為真性紅細(xì)胞增多癥(PV)，原發(fā)性血小板增多癥(ET)，骨髓纖維化(MF)及慢性粒細(xì)胞白血病(CML)。除慢性粒細(xì)胞白血病因BCR/ABL融合基因的發(fā)現(xiàn)，其病因、發(fā)病機(jī)制已相對明確外，其他BCR/ABL基因陰性的MPN的病因機(jī)制尚不甚明了。近年來，多個分子標(biāo)志物，如JAK2V617F，JAK2外顯子12，MPL515和TET2等相繼被發(fā)現(xiàn)，這些標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)

2、對于理解MPN的分子發(fā)病機(jī)制具有重要意義，也有助于對這類疾病的患者進(jìn)行診斷和治療。但是，仍有相當(dāng)部分MPN患者存在診斷困難。有研究表明部分急性髓系白血病(AML)及骨髓增生異常綜合征(MDS)患者中存在DNMT3A，NPM1和FLT3-ITD基因突變，并且可作為獨立的判斷預(yù)后的指標(biāo)。近年來，有研究表明，DNMT3A，NPM1和FLT3-ITD三種基因突變在動物模型中都有致骨髓增殖性疾病的作用。但到目前為止，MPN患者中DNMT3A，NP

3、M1和FLT3-ITD這三種基因的突變情況，其臨床意義及其與預(yù)后之間的關(guān)系還不完全清楚，并且這三種基因突變與JAK2V617F基因突變之間的關(guān)系也尚未明確，仍有待進(jìn)一步研究明確。
　　目的：
　　了解JAK2V617F，DNMT3A，NPM1和FLT3-ITD這四種基因突變在MPN患者中的發(fā)生率及分布情況，并研究四種基因突變之間的相互并存或排斥關(guān)系;探索JAK2V617F基因突變與疾病臨床特征及實驗室檢查之間的相關(guān)性;最后進(jìn)

4、一步明確JAK2V617F, DNMT3A，NPM1和FLT3-ITD基因突變在MPN發(fā)生發(fā)展中的作用及機(jī)制。
　　方法：
　　選擇2011年2月至2012年12月在山東大學(xué)齊魯醫(yī)院血液科門診或病房確診的120例MPN患者和9例MDS/MPN患者作為研究對象，120例MPN患者中男56例，女64例，平均年齡為55歲。其中包括PV25例，ET55例，MF24例，MPN-u15例和慢性中性粒細(xì)胞白血病(CNL)1例。提取骨髓白細(xì)

5、胞的基因組DNA，用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法擴(kuò)增基因組DNA中DNMT3A基因第23號外顯子含R882位點的部分片段，NPM1基因第12號外顯子及FLT3第11號外顯子，然后送山東省農(nóng)科院測序中心進(jìn)行雙向測序分析。此外，用TaqMan MGB探針熒光定量PCR方法檢測本組患者中JAK2V617F基因突變的情況。收集本組患者的臨床與實驗室資料，隨訪患者的療效及生存情況，并分組進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　1.120例MP

6、N患者共檢出72例JAK2V617F突變，突變率為60％(72/120);其中PV19例，突變率76％(19/25)，ET33例，突變率60％(33/55)，MF9例，突變率37.5％(9/24)，MPN-u10例，突變率66.7％(10/15)。四組之間的發(fā)病率有顯著性差異并且在PV組患者中的發(fā)病率最高。另外，1例CNL患者也檢測到JAK2V617F突變，9例MDS/MPN患者中檢測到1例JAK2V617F突變，突變率為11.1％(1

7、/9)。
　　2.72例JAK2V617F突變患者的平均年齡高于野生型。在PV和ET患者中，JAK2V617F突變患者的平均年齡高于野生型，而在MF和MPN-u患者中，未觀察到此現(xiàn)象。在年齡小于60歲的MPN患者中，JAK2V617F突變率為46.9％(30/64)，明顯小于年齡大于60歲的MPN患者的JAK2V617F突變率75％(42/56)。JAK2V617F在男性和女性患者中的突變率分別為57.8％(37/64)和62.5

8、％(35/56)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，即JAK2V617F的突變與年齡無關(guān)。
　　3.JAK2V617F突變型患者的白細(xì)胞計數(shù)，紅細(xì)胞計數(shù)，血紅蛋白水平明顯高于野生型患者，而血小板計數(shù)在兩組之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　4.120例MPN患者中，只有1例MF患者發(fā)生DNMT3A-R882突變，PV,ET和MPN-u患者都沒有發(fā)生DNMT3A-R882位點突變。DNMT3A-R882突變在MF中的發(fā)生率為4％(1/24)，在MP

9、N患者中的總發(fā)生率為1％(1/120)。9例MDS/MPN患者中有1例發(fā)生DNMT3A-R882突變，突變率為11.1％(1/9)。而FLT3-ITD和NPM1基因突變在我們所研究的120例MPN患者和9例MDS/MPN患者中均未檢測到。
　　結(jié)論:
　　1.中國MPN患者中PV, ET和MF患者JAK2V617F突變率較高，其中在PV患者中突變率最高;且其突變與年齡存在相關(guān)性，年齡越大，突變率越高。而突變率與性別無關(guān)。在本

10、研究中，JAK2V617F突變陽性組患者的外周血白細(xì)胞計數(shù)，紅細(xì)胞計數(shù)和血紅和蛋白水平要明顯高于野生型患者。
　　2.只有1個MF患者和1個MDS/MPN患者發(fā)生DNMT3A-R882基因突變，突變率較低。所有患者中均未發(fā)現(xiàn)FLT3-ITD及NPM1基因突變，提示這兩種基因突變可能未參與MPN的發(fā)生發(fā)展或作用極小。此外，要除外我們所研究的患者可能存在這三種基因其他位點的突變的可能性，需要更進(jìn)一步更全面的如全基因組測序等研究來證實。