壯藥白龍抗癌湯劑對小鼠Lewis肺癌生長的影響.pdf

1、目的
　　本實驗通過建立C57BL/6小鼠Lewis肺癌模型，考察臨床用藥壯藥白龍抗癌湯劑對Lewis肺癌小鼠體重變化、腫瘤生長抑制及免疫器官的影響，并通過檢測Lewis實驗小鼠血常規(guī)、血清生化指標(biāo)、血液T淋巴細(xì)胞亞群等血液指標(biāo)，來探討壯藥白龍抗癌湯劑對小鼠Lewis肺癌骨髓抑制、肝腎功能及免疫功能的影響，為研發(fā)壯藥白龍抗癌湯劑抗腫瘤新藥提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法
　　1.Lewis肺癌小鼠造模條件的建立:取處于生長對數(shù)

2、期的Lewis肺癌細(xì)胞，用0.25％胰蛋白酶消化約半分鐘，1000rpm離心5分鐘，去上清液，加培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞并調(diào)整好濃度接種于C57BL/6小鼠身上，根據(jù)腫瘤生長情況，來確定最適合接種的細(xì)胞濃度。
　　2.對Lewis肺癌小鼠飲食的影響:每次給每籠小鼠100g飼料，隔日稱一次剩余的飼料重量，計算出每組小鼠平均每日食用的飼料重量。
　　3.對Lewis肺癌小鼠鼠重的影響:實驗前稱量小鼠體重，停藥后第2天，于取材前，稱量各組小

3、鼠的體重，取材后剝離出完整的瘤體，在電子天平上精確稱量瘤重，根據(jù)公式（實驗后鼠重=取瘤前稱量的小鼠體重—取瘤后稱量的瘤體重量）計算出凈鼠重，實驗前鼠重為接種前一天小鼠的體重。
　　4.對Lewis肺癌小鼠腫瘤體積的影響:于接種第7天后，每隔一天用游標(biāo)卡尺測量小鼠皮下腫瘤最長徑(a)和最短徑(b)(精確到0.01 mm)，計算腫瘤的體積(V=ab2/2)，計算各組腫瘤體積平均值。
　　5.對Lewis肺癌小鼠腫瘤重量的影響及抑

4、瘤率計算:于停藥后第二天，脫頸椎處死小鼠，完整剝離腫瘤，對腫瘤精確稱重，按公式:抑瘤率=（模型對照組平均腫瘤重量—給藥組平均腫瘤重量）/模型對照組平均瘤重量×100％計算。
　　6.對Lewis肺癌小鼠免疫器官的影響:于停藥后第二天，脫頸椎處死小鼠，取各小鼠的脾臟和胸腺稱重。按公式計算脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù):脾臟指數(shù)=餌卑臟質(zhì)量(mg)/體重(g);胸腺指數(shù)=胸腺質(zhì)量(mg)/體重(g)。
　　7.對Lewis肺癌小鼠的骨髓抑制

5、影響:于停藥后第二天，對小鼠眼眶靜脈叢取血，進(jìn)行血常規(guī)檢測。指標(biāo)有:白細(xì)胞數(shù)(WBC)，紅細(xì)胞(RBC)，血小板(PLT)，血紅蛋白(HB)。
　　8.對Lewis肺癌小鼠的生化指標(biāo)的影響:停藥后第二天自小鼠眼眶靜脈叢取血后離心得到血清，測血清生化指標(biāo)。測定的血清生化指標(biāo)有ALT(谷丙轉(zhuǎn)氨酶)、AST(谷草轉(zhuǎn)氨酶)、Crea(肌酐)、BUN(尿素氮)、NSE(神經(jīng)元特異性烯醇化酶)。
　　9.對Lewis肺癌小鼠血液T淋巴細(xì)

6、胞亞群的影響:停藥后第二天，對小鼠眼眶靜脈叢取血，運用流式免疫熒光技術(shù)檢測小鼠血液中的T淋巴細(xì)胞亞群的值。
　　結(jié)果
　　1.確定Lewis肺癌小鼠模型的適宜細(xì)胞濃度為1.0×107個/ml，用量為0.2ml/只。
　　2.對Lewis肺癌小鼠飲食的影響:與空白組比較，壯藥組沒有顯著性差異，對飲食影響不大。
　　3.對Lewis肺癌小鼠鼠重的影響:與空白組比較，壯藥組體重有所降低(P＜0.01)，與化藥組對比，壯

7、藥組體重有所增加（P＜0.01）。
　　4.對Lewis肺癌小鼠腫瘤體積的影響:壯藥與化療藥聯(lián)合使用即綜合組腫瘤體積最小，其次是化藥組。
　　5.對Lewis肺癌小鼠腫瘤重量的影響及抑瘤率:與模型組比較，綜合組瘤重最小(P＜0.01)，抑瘤率最高，達(dá)到73.61％，壯藥組抑瘤率為38.34％，化藥組抑瘤率為54.75％。
　　6.對Lewis肺癌小鼠免疫器官的影響:與化藥組比較，綜合組、壯藥組的脾臟指數(shù)有所升高(P＜0

8、.05)，壯藥組的胸腺指數(shù)也有升高(P＜0.05)。
　　7.對Lewis肺癌小鼠的骨髓抑制影響:與化藥組比較，壯藥組白細(xì)胞數(shù)有所增加(P＜0.05)，反映壯藥組能減輕骨髓抑制作用。
　　8.對Lewis肺癌小鼠的生化指標(biāo)的影響:與化藥組比較，壯藥組ALT有所降低(P＜0.05)。與化藥組比較，壯藥組AST有降低(P＜0.01)。與模型組比較，綜合組、壯藥組NSE有所降低(P＜0.01)。與化藥組比較，綜合組NSE值有所降低

9、(P＜0.05)、壯藥組NSE有所降低(P＜0.01)。
　　9.對Lewis肺癌小鼠血液T淋巴細(xì)胞亞群的影響:與空白組比較，CD4+/CD8+(％)模型組、化藥組、綜合組均有降低(P＜0.01);與模型組比較，化藥組有所降低(P＜0.01)，壯藥組有所升高(P＜0.05)，與化藥組比較，綜合組、壯藥組有所升高(P＜0.01)。
　　結(jié)論
　　1.壯藥組單用對腫瘤有一定的抑制作用，壯藥組與化療藥順鉑聯(lián)用能顯著抑制Lew