復(fù)方祖師麻抗RA的藥代動(dòng)力學(xué)及代謝組學(xué)初步研究.pdf

1、本論文研究來源于國家自然科學(xué)基金“基于PK-PD相關(guān)性及其ADME-Act分析研究甘草協(xié)同祖師麻治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的配伍機(jī)制”(81273655)。
　　祖師麻為瑞香科植物黃瑞香Daphne giraldii Nitsche.、陜甘瑞香Daphne tangutica Maxim.或凹葉瑞香Daphne retusa Hemsl.的干燥莖皮和根皮，為西部民間用藥。祖師麻具有活血、鎮(zhèn)痛和祛風(fēng)除濕的功效，在治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及風(fēng)濕痹痛方面

2、應(yīng)用廣泛。民間用藥經(jīng)驗(yàn)顯示，祖師麻與甘草配伍后具有一定的增效減毒作用，但其作用機(jī)理尚不清楚。復(fù)方祖師麻由祖師麻和甘草組成，本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)兩者以3∶2的比例配伍時(shí)其治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)效果較佳。在此研究基礎(chǔ)上，本文從藥代動(dòng)力學(xué)和代謝組學(xué)兩方面開展研究:比較了復(fù)方祖師麻中多種活性成分在正常及佐劑型關(guān)節(jié)炎大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)特征差異;分析大鼠血漿中內(nèi)源性代謝產(chǎn)物，尋找疾病潛在的生物標(biāo)記物;并與藥理活性評(píng)價(jià)指標(biāo)相結(jié)合，初步探討疾病的發(fā)病

3、機(jī)制和復(fù)方祖師麻的干預(yù)的機(jī)制。
　　研究表明，祖師麻的活性成分類型為香豆素和二萜類，但二萜類成分具有一定的黏膜和皮膚刺激性;香豆素類成分中以瑞香素的研究最為廣泛，其藥理活性較為明確。本文選擇了3種含量較高且活性較強(qiáng)的香豆素類成分（瑞香素、西瑞香素和7-羥基香豆素），作為祖師麻的考察指標(biāo)。甘草的化學(xué)成分極為復(fù)雜，黃酮類和三萜類為其主要活性成分，其中以三萜皂苷——甘草酸的量最多。本文選擇甘草中的3對(duì)苷及其苷元成分進(jìn)行考察，分別為黃酮類

4、成分——甘草苷和甘草素，異黃酮類成分——異甘草苷和異甘草素，以及三萜類成分—甘草酸和甘草次酸。
　　本文建立了復(fù)方祖師麻中多種成分的體內(nèi)外含量測定的LC-MS/MS的方法，在此基礎(chǔ)上，以佐劑型關(guān)節(jié)炎(AA)大鼠為模型，比較了復(fù)方祖師麻中9種活性成分（瑞香素、西瑞香素、7-羥基香豆素、甘草苷、甘草素、異甘草苷、異甘草素、甘草酸和甘草次酸）在健康和疾病狀態(tài)下大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)的差異，結(jié)果發(fā)現(xiàn)藥物的體內(nèi)過程與機(jī)體的生理狀態(tài)密切相關(guān)。與正

5、常組相比，AA模型組大鼠血漿中瑞香素、甘草苷、異甘草苷和甘草酸的生物利用度顯著性降低，甘草酸的生物利用度顯著性增加。正常組甘草苷和異甘草苷的AUG(0-t)分別為45.45±3.89ng·h·mL-1和6.72±0.60ng·h·mL-1， AUC(0-∞)分別為45.55±3.90ng·h·mL-l和6.74±0.60ng·h· mL-1， Cmax分別為58.75±12.54ng·mL-1和8.92±1.68ng· mL-1，模型組

6、分別顯著性降低27.13％(P＜0.01)、39.88％(P＜0.05)、24.57％(P＜0.05)、39.02％(P＜0.01)、48.75％(P＜0.05)和48.09％(P＜0.05);正常組瑞香素和甘草酸AUC(0-∞)分別為255.68±54.77ng·h·mL-1和266.68±49.71ng·h·mL-1，模型組降低34.56％和29.89％（P＜0.05）;模型組甘草次酸的AUC(0-t)和AUC(0-∞)卻增加1.2

7、倍（P＜0.05）;正常組西瑞香素Cmax為14.40±3.31ng·mL-1，模型組顯著性下降50.97％（P＜0.05）;與正常組相比，模型組異甘草苷、異甘草素和甘草酸Tmax顯著性增加，延緩其體內(nèi)吸收。7-羥基香豆素、甘草素的變化不明顯。結(jié)果提示，藥物體內(nèi)過程的復(fù)雜性，受諸多因素的影響。單一考察動(dòng)物正常狀態(tài)下的藥代動(dòng)力學(xué)，并不能真實(shí)的反應(yīng)藥物在疾病狀態(tài)下的體內(nèi)過程。因此采用適當(dāng)?shù)膭?dòng)物模型研究藥物在疾病狀態(tài)下的藥代動(dòng)力學(xué)是十分有意義

8、的，可為指導(dǎo)臨床用藥提供依據(jù)。
　　本文采用代謝組學(xué)方法初步探討了復(fù)方祖師麻治療RA的作用機(jī)制。從生理指標(biāo)（體重、足趾腫脹、關(guān)節(jié)炎指數(shù)和病理切片）和內(nèi)源性代謝物變化的角度描述了AA大鼠模型模擬的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的演變過程，同時(shí)還考察了復(fù)方祖師麻對(duì)AA模型大鼠的干預(yù)作用。建立了較為穩(wěn)定的PCA數(shù)學(xué)模型，解釋AA模型大鼠從原發(fā)性病變到繼發(fā)性病變的動(dòng)態(tài)過程。采用有監(jiān)督的多維分析方法(OPLS-DA)研究正常組與模型組的不同疾病時(shí)期的代謝物變

9、化，找出87個(gè)與疾病相關(guān)的代謝產(chǎn)物。從已鑒定的30個(gè)潛在生物標(biāo)記物變化趨勢可以看出，佐劑型關(guān)節(jié)炎能引起體內(nèi)多種代謝產(chǎn)物紊亂，主要涉及氨基酸、脂類、核酸和維生素代謝通路。復(fù)方祖師麻主要調(diào)控了其中的12種異常代謝物，對(duì)佐劑型關(guān)節(jié)炎的干預(yù)效果良好。結(jié)合藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，本實(shí)驗(yàn)成功建立了AA大鼠模型，該組大鼠的多個(gè)病理指標(biāo)和小分子代謝物均偏離正常狀態(tài);陽性對(duì)照藥（雷公藤多苷）和復(fù)方祖師麻對(duì)AA模型大鼠干預(yù)效果相當(dāng)，但兩者改善的異常代謝物情況不同，