重組高密度脂蛋白-阿霉素復合物用于腫瘤治療的研究.pdf

1、本研究旨在探討將重組高密度脂蛋白(rHDL)應用于化療藥物向腫瘤遞送及克服腫瘤耐藥的可能性，并探討細胞自噬在腫瘤耐藥中的作用。使用硫酸銨梯度法制備重組高密度脂蛋白-阿霉素復合物(rHDL/Dox)，用共聚焦顯微鏡和流式細胞儀觀察肝癌細胞對rHDL/Dox的攝取，用MTT，western blot等方法評價rHDL/Dox對肝癌細胞的殺傷，用小動物活體成像實驗來探討rHDL在小鼠體內(nèi)的肝靶向性。用real time PCR、流式分析和IC

2、50測定等方法證明KBV細胞的耐藥性，用MTT、western blot、細胞凋亡檢測以及Tunel染色等方法觀察rHDL/Dox克服腫瘤耐藥的效果。第三部分用western blot、Cyto-ID染色、EGFP-LC3轉染和電鏡觀察的方法證明rHDL/Dox誘導KBV細胞細胞自噬的發(fā)生，通過聯(lián)用細胞自噬抑制劑和使用RNA干擾技術證明細胞自噬在腫瘤耐藥中的作用。rHDL/Dox具有均勻的粒徑分布（～63nm）及顯著的緩釋功能;共聚焦觀

3、察和流式分析表明，通過SR-B1受體的介導作用rHDL/Dox可以在肝癌細胞內(nèi)積聚能多的阿霉素藥物;Western blot和LDH活性測定表明rHDL/Dox引起HepG2細胞和SMMC-7721細胞更強的caspase-3依賴性的凋亡和乳酸脫氫酶LDH的釋放(930U/L，836U/L);活體成像觀察表明rHDL在小鼠體內(nèi)具有較好的肝靶向性。Western blot實驗結果表明耐阿霉素細胞株KBV可較高水平表達SR-B1受體;與游離

4、阿霉素和脂質體阿霉素相比，rHDL/Dox可更好的克服P-糖蛋白(P-gp)對阿霉素的外排作用，在細胞內(nèi)積聚更多的阿霉素藥物，引起更強烈的caspase-3依賴的細胞凋亡，和核內(nèi)DNA的斷裂。本研究還進一步表明在rHDL/Dox處理KBV細胞時伴隨著細胞自噬的發(fā)生，細胞自噬增強了KBV細胞對阿霉素的耐受和抵抗;聯(lián)用細胞自噬抑制劑氯喹和LY294002后，rHDL/Dox可更好地逆轉腫瘤耐藥，引起更強的細胞凋亡;基因敲除自噬相關基因Atg