血漿高密度脂蛋白亞類及其分布特征.pdf

1、一 血漿高密度脂蛋白亞類的分布特征 從血脂水平出發(fā)，分析血脂及TC／HDL-C、TG／HDL-C比值與HDL亞類分布的關(guān)系。根據(jù)現(xiàn)有資料對(duì)載脂蛋白與HDL亞類分布的關(guān)系進(jìn)行探討。 I.血漿TC／HDL-C、TG／HDL-C比值與HDL亞類關(guān)系 背景與目的：血漿TG水平是導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化(As)及冠心病(CHD)發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，TC與As的發(fā)生呈正相關(guān)而HDL-C與As的發(fā)生和嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)。TC／HDL-C

2、和TG/HDL-C是同時(shí)綜合考慮致As和抗As因素的兩個(gè)參數(shù)。研究發(fā)現(xiàn)HDL參與體內(nèi)膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)(RCT)，可將外周細(xì)胞堆積的膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)至肝臟轉(zhuǎn)化清除，因而具有抗As的作用。脂蛋白是血漿脂質(zhì)的載體，血脂水平變化影響脂蛋白的組成和分布。近年發(fā)現(xiàn)血漿TC／HDL-C、TG／HDL-C比值與As和CHD發(fā)生高度相關(guān)，但TC／HDL-C、TG／HDL-C比值對(duì)HDL亞類組成及含量影響的研究尚未見報(bào)道。 方法：1.采用雙向電泳-免疫印跡

3、檢測(cè)法分析442例受試者血漿HDL亞類的組成及含量。2.根據(jù)TC／HDL-C及TG／HDL-C比值將受試者分組。 結(jié)果：1.隨血漿TC/HDL-C、TG／HDL-C比值增大，小顆粒preB<,1>-HDL、HDL<,3a>含量逐漸升高，大顆粒HDL<,2b>、HDL<,2a>含量逐漸降低。2.TC／HDL-C≤3.3、TG／HDL-C≤2.5時(shí)，受試者HDl<,2b>／preB<,1>-HDL比值為4.7，而TC／HDL-C>6

4、、TG／HDL-C>5時(shí)，受試者HDL<,2b>／preB<,1>-HDL比值為1.1，表明高比值的受試者HDL大、小顆粒比值倒置。3.在TG／HDL-C≤2.5組，無(wú)論TC／HDL-C比值是否增加，preB<,1>-HDL和HDL<,2b>含量幾乎保持一致；但是在TC／HDL-C比值相同各組，隨著TG/HDL-C比值增大，preB<,l>-HDL含量顯著增加而HDL<,2b>含量顯著降低。4.TG/HDL-C比值與小顆粒preB<,1

5、>-HDL和HDL<,3a>含量呈顯著正相關(guān)，與大顆粒HDL<,2a>和HDL<,2b>含量呈顯著負(fù)相關(guān)；而TC／HDL-C比值僅與HDL<,2b>呈顯著正相關(guān)，且TG／HDL-C相關(guān)系數(shù)在數(shù)值上較TC/HDL-C及單純的TG、TC或HDL-C相關(guān)系數(shù)更大。 結(jié)論：1.TC／HDL-C及TG／HDL-C比值可以作為反映HDL亞類分布變化的準(zhǔn)確指標(biāo)。2.TC/HDL-C及TG/HDL-C比值同時(shí)增大，HDL顆粒變小的趨勢(shì)明顯，成熟

6、大顆粒與新生小顆粒比例倒置，提示HDL成熟受阻，RCT作用減弱。3.TG／HDL-C比值可能是影響血漿HDL亞類分布的更加突出的指標(biāo)。 II.高膽固醇血癥及混合型高脂血癥患者血漿HDL亞類組成及含量 背景與目的：高膽固醇血癥以血漿TC水平升高而TG水平保持正常為特征，混合型高脂血癥則表現(xiàn)為血漿TC、TG水平同時(shí)升高。研究證實(shí)高膽固醇血癥及混合型高脂血癥均與As和CHD的發(fā)生相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)新生缺脂的小顆粒preB<,l>-

7、HDL從外周攝取膽固醇并在各種血漿因子的參與下，按preB<,l>-HDL→preβ<,2>-HDL→preβ<,3>←HDL<,3>→HDL<,2>代謝過(guò)程成熟，逐步轉(zhuǎn)變?yōu)楦缓懝檀减サ腍DL<,2>而被運(yùn)至肝臟進(jìn)一步代謝。因此，HDL亞類組成、含量及分布變化與RCT有密切關(guān)系。 方法：采用雙向電泳．免疫印跡檢測(cè)法分析了66例高膽固醇血癥患者、59例混合型高脂血癥患者以及242例血脂正常者HDL亞類的組成及含量。 結(jié)果

8、：1．與血脂正常者比較，高膽固醇血癥及混合型高脂血癥患者血漿小顆粒Dreβ<,1>-HDL、HDL<,3c>、HDL<,3b>及HDL<,3a>含量顯著升高，而大顆粒HDL<,2a>、HDL<,2b>含量顯著降低。2．與高膽固醇血癥患者相比，混合型高脂血癥患者血漿preβ<,1>-HDL含量顯著升高而HDL<,2a>、HDL<,2b>含量顯著降低。3．在TC≥240 mg／dl受試者，隨血漿TG水平的升高，preβ<.1>-HDL、HD

9、L<,3a>含量逐漸增加，而HDL<,2a>、HDL<,2b>含量逐漸減少。4．高膽固醇血癥及混合型高脂血癥患者血漿TG、TC、LDL-C與preβ<,1>-HDL含量顯著正相關(guān)，與HDL<,2b>含量顯著負(fù)相關(guān)；且混合型高脂血癥患者血漿HDL-C與HDL<,2b>含量顯著正相關(guān)。 結(jié)論：1．高膽固醇血癥患者和混合型高脂血癥患者血漿HDL顆粒均呈變小趨勢(shì)，這種趨勢(shì)在混合型高脂血癥患者更為明顯，表明混合型高脂血癥患者HDL成熟代謝

10、受阻、RCT作用減弱更加明顯。2．無(wú)論高膽固醇血癥患者還是混合型高脂血癥患者，隨血漿TG水平升高HDL顆粒呈變小趨勢(shì)更加顯著，表明TG水平是影響HDL亞類分布十分重要的因素。 二 HDL亞類分布與ApoA-I基因多態(tài)性的關(guān)系 背景與目的：ApoA-I是HDL的主要蛋白成分，在抗As過(guò)程中發(fā)揮重要作用。ApoA-I基因啟動(dòng)子區(qū)域—78bp G／A堿基置換可破壞一個(gè)Msp I酶切位點(diǎn)，內(nèi)含子I+83bp C／T的堿基置換可破

11、壞另—Msp I酶切位點(diǎn)。ApoA-I基因與ApoC-Ⅲ及ApoA-IV基因形成緊密連鎖的基因簇。研究認(rèn)為ApoA-I基因變異可作為一個(gè)標(biāo)記點(diǎn)，與Apoc-Ⅲ基因發(fā)生連鎖不平衡，影響Apo C-Ⅲ的表達(dá)或代謝，累及富含TG的脂蛋白的代謝從而導(dǎo)致血脂變化。近年來(lái)學(xué)者們對(duì)ApoA-I基因多態(tài)性與血漿ApoA-I及HDL含量的關(guān)系方面做了大量研究，但是ApoA-I基因突變對(duì)HDL亞類改變的影響方面尚未見報(bào)道。 方法：采用聚合酶鏈反應(yīng)-

12、限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性和雙向電泳-免疫印跡檢測(cè)法，分析307例受試者ApoA-I基因型、HDL亞類分布及相對(duì)含量。 結(jié)果：1．Apo A-I基因-78bp位點(diǎn)和+83bp位點(diǎn)的多態(tài)性分別以G／G和C／C基因型占優(yōu)勢(shì)，男女之間-78bp位點(diǎn)A等位基因的頻率以及+83bp位點(diǎn)T等位基因的頻率均無(wú)顯著性差異。2.與G／G基因型者相比，G／A突變受試者血漿TG、ApoC-II、ApoC-III、preB<,1>-HDL、HDL<,3a>水

13、平以及TG／HDL-C比值顯著升高，此外A/A基因型者HDL<,2a>和HDL<,2b>水平顯著降低。3．與-78bp位點(diǎn)相同基因型的男性比較，女性血漿apoA-I、HDL-C、HDL<,2a>及HDL<,2b>水平顯著升高，而preB<,1>-HDL、HDL<,3b>水平以及TG／HDL-C比值顯著降低。4．+83bp位點(diǎn)C／C和C／T基因型受試者之間，未見血脂、脂蛋白及HDL亞類含量之間的差異。 結(jié)論：1．Apo A-I基因

14、-78bp位點(diǎn)多態(tài)性與HDL亞類分布相關(guān)，未見Apo A-I基因+83bp位點(diǎn)多態(tài)性與HDL亞類分布相關(guān)。2．Apo A-I基因-78bp位點(diǎn)G／A突變受試者血漿HDL亞類顆粒呈減小的趨勢(shì)，提示這些受試者血漿HDL成熟代謝可能受阻，RCT作用減弱。3．ApoA-I基因-78bp位點(diǎn)基因型相同的受試者，男性血漿HDL顆粒比女性小。 三 HDL亞類抗脂多糖毒性作用的研究 背景與目的：脂多糖(LPs)是機(jī)體典型的天然免疫激活劑

15、，在革蘭氏陰性菌感染的發(fā)病過(guò)程中擔(dān)當(dāng)十分重要的角色。LPS通過(guò)lipid A與受體結(jié)合，激活CDl4陽(yáng)性細(xì)胞，使其合成并釋放腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素(IL)及干擾素(IFN)等細(xì)胞因子，LPS借助這些因子發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)HDL能與LPS結(jié)合，具有對(duì)抗LPS毒性的作用。一般認(rèn)為，HDL與LPS結(jié)合時(shí)，LPS的lipid A插入到HDL分子外殼的磷脂層中。因此，這種結(jié)合可以有效地封閉LPS的活性中心，競(jìng)爭(zhēng)性地抑制

16、LPS與其受體結(jié)合，降低LPS對(duì)靶細(xì)胞的激活作用，減少炎癥介質(zhì)的釋放，從而緩解LPS引起的免疫炎癥反應(yīng)。 方法：1．分離純化preβ<,1>-HDL、HDL<,3>、HDL<,2>。2．轉(zhuǎn)染NF-kB-luc報(bào)告質(zhì)粒至HepG2細(xì)胞，觀察細(xì)胞接種密度、培養(yǎng)時(shí)間、及LPS濃度等對(duì)熒光素酶表達(dá)的影響。3．分析HDL對(duì)經(jīng)LPS刺激的轉(zhuǎn)染細(xì)胞熒光素酶表達(dá)的影響。4．分析HDL與轉(zhuǎn)染細(xì)胞孵育對(duì)LPS誘導(dǎo)的熒光素酶表達(dá)的影響。5．分析HDL

17、與LPS孵育對(duì)LPS誘導(dǎo)的熒光素酶表達(dá)的影響。6．運(yùn)用逆轉(zhuǎn)錄．多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PcR)技術(shù)，分析HDL與LPs孵育對(duì)LPs誘導(dǎo)的TNF-α mRNA表達(dá)的影響。 結(jié)果：1．HeDG2細(xì)胞經(jīng)LPS刺激后分別加入preβ<,1>-HDL、HDL<,3>及HDL<,2>均未見LPS誘導(dǎo)的熒光素酶活性發(fā)生改變。2．大顆粒HDL<,2>孵育的細(xì)胞熒光素酶表達(dá)顯著受到抑制；HDL<,3>孵育的細(xì)胞熒光素酶表達(dá)略有降低；preβ<,1>-