不同灸法對實驗性RA的抗炎效應及其HSP70調(diào)控機制研究.pdf

1、目的:
　　本研究在把握艾灸溫熱刺激特性、HSP70與熱刺激和抗炎密切相關的基礎上，以針灸理論為指導，直接灸、隔姜灸、溫和灸日本大耳白兔“腎俞”、“足三里”治療實驗性RA，圍繞滑膜炎癥關鍵病理環(huán)節(jié)，選擇HSP70作為研究切入點，以“艾灸溫熱刺激—HSP70表達與調(diào)控—抗炎效應”為研究主線，運用免疫組化、Western-blot等方法技術，探索不同灸法治療RA的抗炎作用及其HSP70分子調(diào)控機制，進一步深化艾灸治療RA的原理研究，為

2、臨床運用灸法治療RA提供更豐富的科學依據(jù)。
　　方法:
　　日本大耳白兔64只，體重2.5±0.25kg，雌雄各半，隨機分為空白對照組(簡稱空白組)、RA模型組(簡稱模型組)、直接灸治療組(簡稱直接灸組)、隔姜灸治療組(簡稱隔姜灸組)、溫和灸治療組(簡稱溫和灸組)、直接灸＋槲皮素阻斷組（簡稱直+槲組）、隔姜灸＋槲皮素阻斷組（簡稱隔+槲組）、溫和灸＋槲皮素阻斷組（簡溫+槲組），每組8只日本大耳白兔。采用福氏完全佐劑塑造實驗性R

3、A模型，并于造模后第7天開始分別用直接灸、隔姜灸、溫和灸三種不同方法施灸日本大耳白兔“腎俞”、“足三里”穴各五壯，兩側(cè)交替進行，每日一次；6天為一個療程，共3個療程。在每個治療日早晨對各艾灸阻斷組日本大耳白兔以槲皮素灌胃200mg/kg，在體阻斷HSP70功能。于造模前、造模后第7天、治療后第7天、第14天、第21天分別用軟皮尺測量各組日本大耳白兔左右后肢膝關節(jié)周長。于治療后第21天靜脈注射空氣處死各組日本大耳白兔，取關節(jié)滑膜液、滑膜組

4、織和下丘腦，運用Elisa法檢測滑膜液中細胞因子IL-1、TNF-α、IL-6、IL-8及HSP70含量，用免疫組化法檢測滑膜組織NF-κB相關分子表達及HSP70含量，用Western-blot法檢測下丘腦HSP70含量。
　　結(jié)果:
　　1．造模前,各組間日本大耳白兔左、右膝關節(jié)周長無顯著性差異(P>0.05)，具有可比性。造模后第7天，模型組及各艾灸治療組日本大耳白兔左右膝關節(jié)周長均較空白組明顯升高(P<0.01)，各

5、檢測時間點模型組日本大耳白兔左右膝關節(jié)周長均明顯高于空白組(P<0.01)，說明造模成功且炎癥持續(xù)存在；治療后第7天、14天、21天，各艾灸治療組日本大耳白兔左右膝關節(jié)周長明顯低于模型組(P<0.01)，說明三種灸法均有明顯抗炎效應；治療后第21天，各個艾灸組中，隔姜灸組日本大耳白兔左右膝關節(jié)周長明顯低于溫和灸組、直接灸組(P<0.05），抗炎效應更為突出。槲皮素阻斷各艾灸組之間無顯著性差異。
　　2．模型組 IL-1、TNF-α

6、、IL-6、IL-8值明顯高于空白組(P<0.01)；與模型組相比，各艾灸治療組IL-1、TNF-α、IL-6、IL-8值明顯降低有顯著性差異(P<0.05，P<0.01)；各艾灸組中，與溫和灸組、直接灸組比較，隔姜灸組 IL-1、TNF-α、IL-6、IL-8值降低明顯，有顯著性差異（P<0.05，P<0.01）。槲皮素阻斷各艾灸組之間IL-1、TNF-α、IL-6、IL-8值無顯著性變化。與隔姜灸組比，槲皮素阻斷組隔姜灸組IL-1、

7、IL-6、IL-8值明顯升高，(P<0.01)有顯著性差異。
　　3．模型組NF-κBp65、NF-κBp50、IKK值明顯高于空白組(P<0.01)；與模型組相比，各艾灸治療組NF-κBp65、NF-κBp50、IKK值明顯降低有顯著性差異(P<0.05， P<0.01)；各艾灸組中，與溫和灸組、直接灸組比較，隔姜灸組NF-κBp65、NF-κBp50、IKK值降低明顯，有顯著性差異（P<0.05，P<0.01）。槲皮素阻斷各艾

8、灸組之間NF-κBp65、NF-κBp50、IKK值無顯著性差異。與隔姜灸組比，槲皮素阻斷隔姜灸組NF-κBp65、NF-κBp50、IKK值明顯升高（P<0.05，P<0.01）。
　　4．模型組滑膜液HSP70值高于空白組(P<0.01)；與模型組相比，各艾灸治療組滑膜液HSP70值明顯增高(P<0.01，P<0.05)；與相對應的艾灸組比較，槲皮素阻斷各艾灸組滑膜液HSP70值明顯降低，有顯著性差異（P<0.01）。

9、　　5．模型組滑膜組織HSP70值高于空白組(P<0.05)；與模型組相比，各艾灸治療組滑膜組織HSP70值明顯增高(P<0.01，P<0.05)；與相對應的艾灸組比較，槲皮素阻斷各艾灸組滑膜組織HSP70值明顯降低，有顯著性差異（P<0.01，P<0.05）。
　　6.模型組下丘腦HSP70值與空白組比較明顯升高(P<0.05)；與模型組相比，各艾灸治療組下丘腦HSP70值明顯升高(P<0.01，P<0.05)；與相對應的艾灸組

10、比較，各艾灸組下丘腦HSP70無明顯差異。
　　結(jié)論:
　　1.不同灸法均具有明確的抗炎效應，但以隔姜灸作用最為明顯，而運用工具藥槲皮素可以取消不同灸法之間的抗炎效應差異。
　　2.不同灸法均可誘導滑膜組織和滑膜液RA模型動物HSP70大量表達，運用槲皮素可在一定程度上抑制HSP70表達，提示HSP70可能在不同灸法的抗炎效應中發(fā)揮重要作用。
　　3.雖然槲皮素可以取消隔姜灸與溫和灸、直接灸的抗炎效應差異，但并不