Theacrine對水浸拘束應激負荷小鼠海馬神經元增殖的影響及機制研究.pdf

1、目的:建立水浸拘束應激(CWIRS)負荷小鼠抑郁模型,研究1,3,7,9-四甲基尿酸(Theacrine,Tc)對CWIRS誘導的小鼠抑郁樣癥狀的影響,并從神經再生的角度去探討其作用機制。
　　方法:(1)藥效考察:采用CWIRS建立小鼠抑郁癥模型,用經典的行為學實驗(懸尾實驗、強迫游泳、高價十字迷宮以及糖水偏愛實驗)評價造模效果以及考察藥物的干預作用;用自發(fā)活動箱對給藥后小鼠的自發(fā)活動進行測定,以考察藥物對小鼠是否有中樞興奮作用

2、;采用HPLC-ESA方法檢測CWIRS對小鼠海馬中神經遞質含量的影響以及給予Tc干預后神經遞質含量變化。(2)作用機制探究:采用 HPLC-UV方法分析考察 Tc對 CWIRS小鼠血漿中皮質酮(corticosterone,CORT)含量的影響;采用免疫熒光技術考察Tc對CWIRS小鼠海馬神經元增殖的影響。此外,本課題還采用HPLC方法來分析考察Tc對小鼠海馬組織中磷酸二酯酶(PDEs)活性的影響;用ELASA方法考察Tc對PC12細

3、胞中cAMP含量的影響;采用Western blotting方法考察Tc對CWIRS小鼠海馬組織中CREB、p-CREB、BDNF、TrkB及 p-TrkB等蛋白表達的影響。最后,建立了皮質酮損傷細胞模型,用Western blotting方法考察Tc對PC12細胞中CREB、p-CREB、BDNF、TrkB及 p-TrkB等蛋白表達的影響,給予Rp-cAMP后,再次考察Tc對上述蛋白表達的影響。
　　結果:CWIRS導致小鼠出現(xiàn)

4、抑郁樣癥狀,表現(xiàn)為絕望、焦慮、興趣缺乏以及海馬組織中5-hydroxytryptamine(5-HT)含量顯著降低,而5-hydroxy indole acetic acid(5-HIAA)含量顯著升高等。給予Tc及Ca可以有效改善應激小鼠抑郁樣行為,表現(xiàn)為縮短應激后小鼠強迫游泳和懸尾實驗中的不動時間,延長應激小鼠在十字迷宮實驗中進入開放臂的時間和增加進入開放臂的次數(shù),逆轉應激導致小鼠糖水偏嗜度降低現(xiàn)象以及改善應激導致的海馬5-HT水平

5、低下這一癥狀。機制研究發(fā)現(xiàn),CWIRS可以導致小鼠血漿CORT水平顯著升高,而只有Tc可以逆轉應激導致的CORT水平升高作用;免疫熒光結果表明,Ca和Tc均可以改善應激導致的海馬BrdU+/DCX+陽性細胞數(shù)降低這一作用。進而我們又從分子水平探究了Tc促進神經元增殖的分子機制,體內結果顯示,Ca和Tc促進CWIRS小鼠海馬組織中p-CREB、BDNF及 p-TrkB等蛋白表達。在體外細胞模型上也發(fā)現(xiàn),200μM皮質酮會導致細胞中 p-C

6、REB、BDNF及 p- TrkB等蛋白表達水平降低,Tc和Ca可以有效逆轉這一作用,而Rp-cAMP完全拮抗了Tc促進p-CREB蛋白表達的作用,部分拮抗了 Tc促進 BDNF和p-TrkB蛋白表達的作用,而 Ca促進p-CREB、BDNF、p-TrkB等蛋白表達的作用被Rp-cAMP全部拮抗。
　　結論:由動物實驗可知和Tc和Ca均可以改善CWIRS誘導的小鼠抑郁樣狀態(tài),且Ca有一定的中樞興奮作用,該作用可能介導了其抗抑郁作用