大腸癌亞細(xì)胞組分蛋白定量研究.pdf

1、論文獨創(chuàng)性聲明本論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。論文中除了特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，不包含其他人或其它機(jī)構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。其他同志對本研究的啟發(fā)和所做的貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的聲明并表示了謝意。作者簽名論文使用授權(quán)聲明日期： 矽應(yīng)。萬乃0本人完全了解復(fù)旦大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件，允許論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢怨颊撐牡娜炕虿糠謨?nèi)容，可以采用影印、縮印或其

2、它復(fù)制手段保存論文。保密的論文在解密后遵守此規(guī)定。作者簽名 導(dǎo)師簽名1 籬 )∥刁 V 日期：矽償、歹珈目錄目錄摘要????????????????????????二??- ．．_ 一= ．= ．_ ．．：?????．IA B S T R A C T ????????????????????????????????????????????一I第一章前言?????????????????????????????????．11 ．1 大腸癌

3、的研究背景???????????????????????????．11 ．1 ．1 大腸癌流行病學(xué)?????????????????????????．．11 ．1 ．2 大腸癌的分子遺傳癌變機(jī)制????????????????????．21 ．1 ．3 大腸癌的分期??????????????????????????．31 ．1 ．4 大腸癌的早期診斷????????????????????????51 ．1 ．4 ．1 肛門指檢???

4、??????????????????????．．51 ．1 ．4 ．2 糞便潛血試驗???????????????????????．．51 ．1 ．4 ．3 腸鏡?????????????????????????????????????61 ．1 ．4 ．4 氣鋇雙重對比灌腸?????????????????????一61 ．1 ．4 ．5 其他檢查?????????????????????????一61 ．1 ．5 大腸癌相關(guān)的腫瘤標(biāo)

5、志物?????????????????????．71 ．1 ．5 ．1 基因及其產(chǎn)物???????????????????????．．71 ．1 ．5 ．2 表觀遺傳學(xué)改變???????????????????????81 ．1 ．5 ．3 轉(zhuǎn)錄組??????．????????????????????．．91 ．1 ．5 ．4 M i c r o R N A ?????????????????????????????????．．91 ．

6、1 ．6 本節(jié)小結(jié)???????????????????????????．1 0第二章i T R A Q 技術(shù)聯(lián)合L C ．M S 定量研究大腸癌細(xì)胞骨架蛋白???????????．1 12 ．1 前言????????????????????????????????一1 12 ．1 ．1 細(xì)胞骨架系統(tǒng)??????????????????????????1 l2 ．1 ．2 細(xì)胞外基質(zhì)( e x t r a - c e l l u l a

7、 r m a t r i x ，E C M ) ???????????????．1 22 ．1 ．3 細(xì)胞質(zhì)骨架蛋白?????????????????????????1 22 ．1 ．4 細(xì)胞核骨架蛋白?????????????????????????1 32 ．2 材料和方法?????????????????????????????．．1 52 ．2 ．1 儀器和試劑???????????????????????????1 52 ．2

8、 ．1 ．1 儀器???????????????????????????．1 52 ．2 ．1 ．2 試劑???????????????????????????．1 62 ．2 ．2 研究對象和樣品采集???????????????????????l 62 ．2 ．3 顯微切割????????????????????????????l 72 ．2 ．3 ．1 冰凍切片的制作和染色???????????????????1 72 ．2 ．3

9、 ．2 顯微切割?????????????????????????1 82 ．2 ．4 細(xì)胞勻漿和細(xì)胞骨架蛋白提取???????????????????1 82 ．2 ．5 蛋白質(zhì)定量???????????????????????????1 92 。2 。6 蛋白純化、酶解和i T R A Q 標(biāo)記??????????????????．．1 92 ．2 ．7 肽段的兩維色譜分離和質(zhì)譜鑒定??????????????????2 12 ．2

10、 ．8 功能分析????????????????????????????2 12 ．3 結(jié)果和討論?????????????????????????????．．2 22 ．3 ．1 激光顯微切割條件的優(yōu)化和定量??????????????????2 22 ．3 ．1 ．1 顯微切割觀察???????????????????????2 22 ．3 ．1 ．2 顯微切割條件優(yōu)化?????????????????????2 62 ．3 ．1