替米沙坦對hcy誘導(dǎo)的人內(nèi)皮細胞NADPH氧化酶表達的影響及與PPAR-δ的關(guān)系.pdf

1、目的:
　　觀察替米沙坦對同型半胱氨酸誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)NADPH氧化酶亞基gp91,p22表達的影響及ROS的形成,探討其在抗氧化應(yīng)激中與PPAR-δ的關(guān)系,闡明該藥物抗動脈粥樣硬化的可能機制。
　　方法:
　　應(yīng)用Ⅰ型膠原酶消化法分離培養(yǎng)HUVECs;Real-timePCR法檢測NADPH氧化酶gp91,p22mRNA表達;Western-blot法測NADPH氧化酶gp91,p22蛋白表達;

2、二氯熒光乙酰乙酸鹽染色測定細胞內(nèi)活性氧(ROS)水平。實驗分組:(1)空白對照組(2)同型半胱氨酸組(3)PPAR-δ激動劑組(4)PPAR-δ抑制劑組(5)PPAR-δ激動劑+抑制劑組(6)替米沙坦組(7)替米沙坦+PPAR-δ抑制劑組
　　結(jié)果:
　　(1)經(jīng)體外膠原酶消化法分離培養(yǎng)的HUVECs,形態(tài)學(xué)觀察呈典型的“鋪路石”特征及免疫熒光鑒定大于95％的細胞呈vWF陽性,即為內(nèi)皮細胞;(2)與對照組相比,Hcy呈濃度依

3、賴性增加HUVECsROS水平,當(dāng)Hcy10μM時,HUVECsROS含量顯著增加(P<0.01);(3)與對照組相比,Hcy呈濃度依賴性促進HUVECsNADPH氧化酶亞基gp91,p22表達,當(dāng)Hcy10μM時,gp91,p22mRNA表達顯著增加(P<0.05);(4)替米沙坦呈濃度依賴性抑制Hcy(1000μM)誘導(dǎo)HUVECsROS水平,與Hcy組相比,替米沙坦為0.1μM時,HUVECsROS水平顯著降低(P<0.05);(

4、5)與對照組相比,替米沙坦能顯著抑制HUVECsNADPH氧化酶亞基gp91,p22mRNA表達(P<0.05);(6)PPAR-δ激動劑(GW0742)可以抑制Hcy誘導(dǎo)的HUVECs內(nèi)ROS形成,顯著地降低NADPH氧化酶亞基gp91,p22mRNA表達及蛋白水平,PPAR-δ阻斷劑(GSK0660)能顯著抑制替米沙坦的上述效應(yīng)。
　　結(jié)論:
　　(1)Hcy能誘導(dǎo)HUVECs內(nèi)的ROS的水平及NADPH氧化酶gp91,