2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩34頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、目的:糖尿病(diabetes mellitus,DM)以長期慢性高血糖為發(fā)病基礎(chǔ),胰島素分泌缺陷和(或)胰島素抵抗為特征的一組代謝性疾病。隨著經(jīng)濟的發(fā)展,人們生活方式的改變,糖尿病患病率顯著增加。多種代謝紊亂會導致糖尿病血管內(nèi)皮細胞功能障礙,從而引起一系列的糖尿病血管并發(fā)癥,據(jù)統(tǒng)計糖尿病血管并發(fā)癥已成為糖尿病致殘致死的主要原因,因此保護血管內(nèi)皮細胞對糖尿病患者具有重要意義。糖尿病血管并發(fā)癥的發(fā)病機制主要包括多元醇通路、蛋白激酶C活化、

2、糖基化終產(chǎn)物形成及其受體活化、己糖胺途徑和氧化應(yīng)激水平升高等,其中氧化應(yīng)激被認為是始動環(huán)節(jié)及關(guān)鍵因素。因此本研究采用H2O2刺激內(nèi)皮細胞制備氧化應(yīng)激模型模擬糖尿病血管病變。胰高血糖素樣肽-1(Glucagon-like peptide1,GLP-1)是由腸道L細胞分泌的一種肽類激素,通過葡萄糖依賴的方式作用于胰島β細胞,促進胰島素的生物合成和分泌。研究表明GLP-1還可刺激胰島β細胞的增殖和分化,抑制胰島β細胞凋亡,增加胰島β細胞數(shù)量,

3、同時還可抑制胰高血糖素的分泌、減少肝糖原的輸出等。GLP-1不僅能夠降低血糖、維持血糖穩(wěn)定,還能抑制食欲,但是因其半衰期極短,易被體內(nèi)二肽基肽酶Ⅳ(dipeptidyl proteaseⅣ,DPP-Ⅳ)降解,因此在臨床應(yīng)用方面受到了限制。GLP-1類似物及DPP-Ⅳ抑制劑克服了其半衰期短的缺陷,因此逐漸應(yīng)用于2型糖尿病的臨床治療。近年來有研究表明GLP-1不僅能夠降低血糖,維持血糖穩(wěn)定,同時對心血管具有重要的保護作用,不僅可減輕血管的炎

4、性損傷,其受體激動劑還可刺激內(nèi)皮細胞增殖,對損傷的血管進行修復,但其對H2O2所致內(nèi)皮細胞的損傷是否具有保護作用尚不清楚。因此,本研究以H2O2刺激原代培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞制備氧化應(yīng)激細胞模型,觀察經(jīng)GLP-1(7-36)干預后是否能降低H2O2所致的內(nèi)皮細胞損傷。
  方法:①人臍靜脈內(nèi)皮細胞分離培養(yǎng):采用膠原酶灌注消化法分離人臍靜脈內(nèi)皮細胞,接種至包被有多聚賴氨酸的25cm2的培養(yǎng)瓶中,24h后更換培養(yǎng)液,以后每隔2d換液1

5、次。當原代細胞融合85%-90%以上后,加入0.05%胰蛋白酶-0.02%EDTA溶液消化,傳代培養(yǎng)。第四代內(nèi)皮細胞用于測定細胞活力。②人臍靜脈內(nèi)皮細胞的鑒定:應(yīng)用兔抗人Ⅷ因子單克隆抗體對人臍靜脈內(nèi)皮細胞進行免疫細胞化學染色,鑒定人臍靜脈內(nèi)皮細胞。③CCK-8法測定細胞活力:顯微鏡下觀察,將長至大約70%的人臍靜脈內(nèi)皮細胞,隨機分為5組,每組中分別加入0μM、100μM、200μM、400μM、800μM的H2O2,繼續(xù)培養(yǎng)8、16、2

6、4 h,到達規(guī)定時間,于450nm處用多功能酶標儀測定各孔吸光度值,計算各組別細胞存活率,選定合適的刺激濃度及時間。⑤GLP-1(7-36)干預后CCK-8法測定細胞活力:將長至70%的內(nèi)皮細胞隨機分為對照組及刺激組,刺激組加入200μM的H2O2的同時分別加入0nM、100nM、200nM、400nM、800nM的GLP-1(7-36)孵育24小時,測定吸光度值,計算細胞存活率。⑤統(tǒng)計學方法:所有數(shù)據(jù)采用(x)±s表示。用SPSS13

7、.0軟件進行數(shù)據(jù)處理,采用方差分析和獨立樣本t檢驗進行統(tǒng)計學分析,以P<0.05為有統(tǒng)計學意義。
  結(jié)果:
  1、人臍靜脈內(nèi)皮細胞鑒定:兔抗人Ⅷ因子單克隆抗體免疫細胞化學染色,陽性反應(yīng)物呈棕黃色,反應(yīng)物分布于內(nèi)皮細胞的胞質(zhì)內(nèi)。染色結(jié)果顯示,第一代人臍靜脈內(nèi)皮細胞胞體飽滿,呈梭形或多邊形,細胞表面光滑,邊界清楚。
  2、細胞活力測定:不同濃度的H2O2刺激人臍靜脈內(nèi)皮細胞不同時間后,細胞活力明顯降低(P<0.05)

8、,并且表現(xiàn)出一定的劑量依賴性,其中給予200μM H2O2刺激24h細胞存活率降低至67%。
  3、給予GLP-(7-36)干預后內(nèi)皮細胞的活力明顯上升,從200nMGLP-1(7-36)干預濃度其具有統(tǒng)計學意義(P<0.05),并且表現(xiàn)出一定的劑量依賴性,其中200nM GLP-1(7-36)干預后細胞活力上升至88%。
  結(jié)論:
  1、H2O2刺激可引起內(nèi)皮細胞活力明顯下降,提示氧化應(yīng)激引起內(nèi)皮細胞損傷可能是

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論