蓮心生物堿的熒光法含量測(cè)定及甲基蓮心堿對(duì)胺碘酮藥代動(dòng)力學(xué)的影響.pdf

1、第一部分RP-HPLC-FL同時(shí)測(cè)定蓮子心中三種雙芐基異喹啉類生物堿的含量
　　 本文建立了一種新的RP-HPLC-FL法同時(shí)測(cè)定蓮子心中三種雙芐基異喹啉類生物堿含量的方法，并將該方法和RP-HPLC-UV 做比較。以Hypersil-C18 （250 mm×4.6mm,5μm）為固定相，甲醇-乙腈-水-三乙胺（20：40：40：0.12，v/v/v/v）為流動(dòng)相，紫外檢測(cè)波長和熒光檢測(cè)波長分別從紫外掃描和熒光掃描獲得，流速為1

2、.0 mL·min-1。結(jié)果發(fā)現(xiàn)三種生物堿的熒光激發(fā)光譜和發(fā)射光譜圖各自之間相似，熒光最佳波長為λex=280 nm和λem=620 nm。HPLC-UV和HPLC-FL 測(cè)定三種生物堿，其線性分別在1~50 μg/mL和10~100 μg/mL 范圍內(nèi)良好，日內(nèi)和日間RSD 值在1.0~8.0％，3種生物堿的加樣回收率在95~105％。紫外檢測(cè)的最低檢測(cè)限和最低定量限分別為250~500ng/mL和500~1000 ng/mL，熒光檢

3、測(cè)的最低檢測(cè)限和最低定量限分別為500~1000ng/mL和1000~2500 ng/mL。利用兩種檢測(cè)器測(cè)定了不同批次提取的蓮心總堿中3中生物堿的含量，結(jié)果顯示兩種方法測(cè)得的含量相近。這表明：蓮子心中3 種雙芐基異喹啉類生物堿的RP-HPLC-FL 檢測(cè)方法簡單、可靠、結(jié)果準(zhǔn)確，是一種新的樣品含量測(cè)定方法。
　　 第二部分甲基蓮心堿對(duì)胺碘酮在大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)的影響研究
　　 1．胺碘酮的小樣本量血樣藥物濃度測(cè)定方法的優(yōu)化

4、關(guān)于胺碘酮（amiodarone）在生物樣本中濃度的測(cè)定方法，文獻(xiàn)已有報(bào)道。這些方法存在針對(duì)大樣本量的生物樣品或固相萃取等耗費(fèi)比較大等缺點(diǎn)。本部分采用耗費(fèi)比較小的沉淀蛋白和液-液萃取結(jié)合的方法來處理小樣本量生物樣本，優(yōu)化了amiodarone的測(cè)定方法。本方法采用Agilent 1100 系列高效液相色譜儀 (G1310A 平流泵，20 μL 定量環(huán)手動(dòng)進(jìn)樣器，G1314A 可變波長紫外檢測(cè)器，LGC-1025M 柱溫箱，Sepu300

5、0p 色譜工作站)，以Hypersil ODS-C18 (4 mm×10 mm，粒徑10 μm)為固定相，以甲醇-水-乙腈-冰醋酸 (200/36/23.6/0.86，v/v/v/v; pH 7.53)為流動(dòng)相，采用乙腈沉淀和二氯甲烷萃取相結(jié)合的方法對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理。在本實(shí)驗(yàn)條件下，amiodarone和內(nèi)標(biāo)它莫昔芬（tamoxifen）均有較好的色譜峰和較好的分離度（R> 2），tamoxifen和amiodarone的保留時(shí)間分別約

6、為8 min和20 min；6個(gè)不同來源的SD 大鼠空白血漿中的雜質(zhì)都不干擾樣品峰，特異性較高；采用加權(quán)二乘法計(jì)算的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性良好，偏差較小，r ≥ 0.99；低、中、高三種濃度的amiodarone的絕對(duì)回收率在80-95％范圍內(nèi)，內(nèi)標(biāo)的回收率在78-82％范圍內(nèi)；日內(nèi)和日間精密度分別小于9.4％和10.1％；
　　 amiodarone的相對(duì)回收率在96-103％范圍內(nèi)；amiodarone 標(biāo)準(zhǔn)品放在4 oC 放置一個(gè)月

7、、經(jīng)過萃取的血漿樣品殘?jiān)谑覝乇軓?qiáng)光放置12 h、血漿樣品在-60 oC的冰箱內(nèi)放置1個(gè)月和經(jīng)歷三次冰融循環(huán)均穩(wěn)定。
　　 2．甲基蓮心堿對(duì)胺碘酮在大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)的影響胺碘酮（amiodarone）又稱乙胺碘呋酮，是一種常用的III 類抗心律失常藥，臨床上用來治療室上性和室性心律失常。Neferine是從中藥蓮子心中提取出來的一種抗心律失常的有效成分，我們課題組擬研究amiodarone和neferine的聯(lián)合用藥。本實(shí)驗(yàn)的

8、目的是考察neferine 對(duì)amiodarone的藥代動(dòng)力學(xué)影響。本實(shí)驗(yàn)采用SD 大鼠，隨機(jī)分成兩組，第一組用于研究neferine 對(duì)口服amiodarone 藥代動(dòng)力學(xué)的影響；第二組用于研究neferine 對(duì)靜脈amiodarone 藥代動(dòng)力學(xué)的影響。實(shí)驗(yàn)中neferine 均采用灌胃給藥。
　　 在預(yù)先設(shè)定的時(shí)間點(diǎn)從大鼠的眼眶靜脈叢處取得血樣并立即離心取出血漿，冰凍在-60oC的冰箱內(nèi)保存，直到樣品分析。獲得amiod