黃連解毒湯三種生物堿在糖尿病大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)研究.pdf

1、黃連解毒湯是中醫(yī)方劑學(xué)中應(yīng)用廣泛的方劑之一,也是體現(xiàn)“異病同治”思想的有效經(jīng)典方劑。黃連解毒湯是清熱解毒方劑的代表方劑,主治一切實火熱毒,三焦熱盛之證。黃連解毒湯自古以來在臨床上的應(yīng)用就非常豐富,涉及多個類別的疾病,有較為成熟的臨床研究背景。同時,根據(jù)黃連解毒湯的現(xiàn)代藥理研究,證實了黃連解毒湯對糖尿病相關(guān)病理過程的干預(yù)有一定療效。本課題旨在從黃連解毒湯治療糖尿病的三個有效生物堿成分——藥根堿、巴馬汀、小檗堿為切入點,進(jìn)行糖尿病大鼠體內(nèi)藥

2、代動力學(xué)實驗,觀察這三個生物堿成分在糖尿病大鼠體內(nèi)的藥動學(xué)特點。同時尋找三者在正常和糖尿病大鼠體內(nèi)的藥動學(xué)差異,從而為黃連解毒湯“異病同治”療效原理提供依據(jù)。
　　 本論文包括文獻(xiàn)整理研究和實驗研究兩個部分。第一部分包含黃連解毒湯的歷史背景、黃連解毒湯的臨床應(yīng)用、黃連解毒湯復(fù)方的現(xiàn)代藥理研究、黃連解毒湯治療糖尿病藥效學(xué)研究、黃連解毒湯中各藥味化學(xué)成分研究、黃連解毒湯的藥代動力學(xué)研究等相關(guān)研究綜述。通過文獻(xiàn)研究可以發(fā)現(xiàn)黃連解毒湯臨

3、床應(yīng)用廣泛,同時具有抗炎、抗菌、抗內(nèi)毒素、抗氧化、降脂、降血糖以及抗腦缺血、抗腫瘤等多種藥理作用[12],是“異病同治”的代表方劑。在黃連解毒湯干預(yù)眾多疾病中,其對糖尿病有明顯的療效,是目前中藥治療糖尿病的關(guān)注方劑之一,對其治療糖尿病的機(jī)制研究有不少實驗方面的探討。其中生物堿類成分對糖尿病有明顯治療作用,主要認(rèn)為小檗堿具有顯著的降糖和降脂作用,藥根堿和巴馬汀等生物堿類成分是治療糖尿病的有效成分乜。[23,24,25,26,28]。在藥代

4、動力學(xué)方面,對黃連解毒湯體內(nèi)藥代動力學(xué)研究主要集中在正常大鼠體內(nèi)的幾類藥物成分的藥動學(xué)分析[35,40,42]在糖尿病大鼠體內(nèi)的藥動學(xué)研究只有黃芩苷和漢黃芩苷等黃酮類成分[41],未見生物堿類的報道。故本文提出藥根堿,巴馬汀和小檗堿是黃連解毒湯中具有代表性的三個有效生物堿,它們在正常大鼠體內(nèi)和糖尿病大鼠體內(nèi)的藥動學(xué)過程如何,在生理和病理不同機(jī)體狀態(tài)下是否存在藥代動力學(xué)差異尚不清楚。
　　 第二部分為實驗研究部分。首先,我們針對目

5、前對于黃連解毒湯中這三個生物堿在血漿中含量的檢測方法主要是HPLC方法,但與液質(zhì)聯(lián)用法相比存在靈敏度不夠高,分析時間較長、消耗生物樣品過大等不足,建立一個靈敏的檢測方法進(jìn)行體內(nèi)藥動學(xué)研究方法,這是本項研究不可或缺的前提。因此在本課題實驗研究中,我們建立靈敏、特異、準(zhǔn)確、可靠的藥根堿、巴馬汀、小檗堿在大鼠血清中液質(zhì)聯(lián)用(LC—MS/MS)分析方法。通過優(yōu)化藥根堿、巴馬汀、小檗堿和內(nèi)標(biāo)延胡索乙素質(zhì)譜檢測條件及確定相關(guān)其他條件并開展方法學(xué)考察

6、。在ESI(+)離子化條件下采用MRM工作模式,用m/z338→322、351.9→308、336→319.8來分別檢測藥根堿、巴馬汀、小檗堿,同時以m/z356.1→192.1來檢測內(nèi)標(biāo)延胡索乙素。藥根堿在0.2 ng·mL-1→～25 ng·ml-1、巴馬汀、小檗堿在0.4 ng·mL-1～50 ng·mL-1呈良好線性關(guān)系。三種生物堿在高、中、低三種濃度的準(zhǔn)確度、精密度、穩(wěn)定性等均符合要求。為下一步黃連解毒湯三種生物堿在大鼠體內(nèi)的

7、藥動學(xué)研究打下基礎(chǔ)。
　　 通過大鼠腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)建立糖尿病模型大鼠后,灌胃給予正常組及糖尿病模型組大鼠黃連解毒湯,經(jīng)時取血,應(yīng)用上一步所建立的液質(zhì)聯(lián)用分析方法進(jìn)行這三種生物堿含藥血清的定量分析,其測定結(jié)果用DAS2.0軟件進(jìn)行分析,以擬合度和AIC值作為判斷標(biāo)準(zhǔn),選擇適當(dāng)?shù)姆渴夷Ｐ?計算藥動學(xué)參數(shù)。研究這三種生物堿在正常和糖尿病狀態(tài)下的藥動特點,并進(jìn)行二者之間的藥動學(xué)比較。結(jié)果表明黃連解毒湯中藥根堿、巴馬汀、小檗

8、堿在正常及糖尿病大鼠體內(nèi)的藥時過程均符合一室開放模型,但三者分別在AUC(0-t)、Tmax、Cmax、MRT(0-t)等方面與正常組存在明顯差別。從結(jié)果分析來看,藥根堿在糖尿病大鼠體內(nèi)藥代過程與正常組大鼠相比有吸收快,血藥濃度高的特點；巴馬汀在糖尿病大鼠體內(nèi)以消除過程緩慢為主要表現(xiàn)；小檗堿在糖尿病大鼠體內(nèi)的吸收要好于正常組,同時會加快代謝。提示黃連解毒湯中這三個生物堿在生理和病理兩個不同機(jī)體狀態(tài)下藥代動力學(xué)存在著一定的差異。