亞甲藍(lán)對(duì)長(zhǎng)入疼痛椎間盤(pán)內(nèi)神經(jīng)纖維影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、腰痛是現(xiàn)代生活中高發(fā)的一種疾病，而椎間盤(pán)則是腰痛的一個(gè)重要致痛部位。這種由腰椎間盤(pán)內(nèi)部結(jié)構(gòu)變化引起的腰痛，稱為椎間盤(pán)源性腰痛。據(jù)估計(jì)40％的慢性腰痛由椎間盤(pán)內(nèi)破裂癥(Internaldiscdisruption，IDD)引起。以往的實(shí)驗(yàn)研究表明，纖維環(huán)放射狀裂隙由髓核延伸到纖維環(huán)外1/3，關(guān)聯(lián)到椎間盤(pán)源性腰痛的發(fā)生。同時(shí)近年來(lái)的一些動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，對(duì)椎間盤(pán)源性腰痛的發(fā)病機(jī)制的探討支持了以上的觀點(diǎn)。但是由于椎間盤(pán)源性腰痛的復(fù)雜性導(dǎo)致適當(dāng)?shù)膭?dòng)

2、物模型制備比較困難，代價(jià)也比較高，設(shè)計(jì)一種相對(duì)簡(jiǎn)單的動(dòng)物模型來(lái)復(fù)制其主要病理改變具有重要的臨床意義。 亞甲藍(lán)是一種臨床上常用的藥物，臨床研究表明其對(duì)椎間盤(pán)源性腰痛的治療有效，而這種治療作用機(jī)制仍不是非常明確，以往的實(shí)驗(yàn)研究表明椎間盤(pán)源性腰痛患者撕裂的纖維環(huán)中有一些對(duì)痛覺(jué)敏感的神經(jīng)纖維長(zhǎng)入，亞甲藍(lán)的這種治療作用與這些神經(jīng)纖維的變化可能有關(guān)聯(lián)。 實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)損傷大鼠尾椎間盤(pán)纖維環(huán)建立IDD模型，通過(guò)組織學(xué)、影像學(xué)和免疫組化的方

3、法觀察椎間盤(pán)損傷后的病理改變情況。并通過(guò)該模型探討亞甲藍(lán)治療作用的機(jī)制。 目的： (1)建立鼠尾椎間盤(pán)內(nèi)破裂模型，觀察大鼠尾椎間盤(pán)損傷后急性、亞急性、慢性病理變化及影像學(xué)特點(diǎn)； (2)通過(guò)免疫組化的方法初步探討亞甲藍(lán)注射治療對(duì)椎間椎間盤(pán)源性腰痛可能的作用機(jī)制。 方法： 18只SD大鼠，均為雄性，體重300-350g，用18G皮膚穿刺針頭分別在尾4/5、尾5/6椎間盤(pán)(大鼠的尾椎數(shù)為19-21節(jié)，取

4、其較寬大的尾椎近段椎間盤(pán)為實(shí)驗(yàn)對(duì)象)前側(cè)進(jìn)行穿刺。持針器夾持針頭，經(jīng)皮穿刺，尖端進(jìn)入3mm，保留5秒鐘，損傷SD大鼠尾4/5椎間盤(pán)全層纖維環(huán)作為實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性對(duì)照椎間盤(pán)；尾5/6全層纖維環(huán)作為實(shí)驗(yàn)椎間盤(pán)；尾6/7作為無(wú)損傷完整對(duì)照椎間盤(pán)。穿刺后將鼠尾反折成U型固定．術(shù)前，術(shù)后11周進(jìn)行腰椎X線和MRI檢查觀察椎體和椎間盤(pán)的影像學(xué)變化；術(shù)后2周，6周，11周，三個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別隨機(jī)提取2只動(dòng)物，處死后進(jìn)行HE，Masson染色光鏡下觀察三組椎間盤(pán)組

5、織學(xué)變化；并且術(shù)后11周，對(duì)余下動(dòng)物實(shí)驗(yàn)組(尾5/6)椎間盤(pán)進(jìn)行亞甲藍(lán)溶液注射，一周后(術(shù)后12周)處死余下12只動(dòng)物，選用SP(神經(jīng)遞質(zhì))、PGP9.5(神經(jīng)纖維)抗體，對(duì)三組椎間盤(pán)進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色觀察神經(jīng)內(nèi)生長(zhǎng)情況． 結(jié)果： 組織學(xué)觀察顯示：尾4/5、尾5/6椎間盤(pán)在實(shí)驗(yàn)期間前部纖維環(huán)損傷處未愈合。通過(guò)X線和MRI定性觀察發(fā)現(xiàn)，尾4/5、尾5/6椎間盤(pán)出現(xiàn)退變征象。損傷后12周，在尾4/5椎間盤(pán)的前1/4區(qū)可以檢

6、測(cè)到SP，PGP9.5免疫陽(yáng)性染色神經(jīng)纖維。神經(jīng)纖維沿穿刺道向內(nèi)生長(zhǎng)。尾5/6椎間盤(pán)相同區(qū)域神經(jīng)纖維出現(xiàn)很少。尾6/7椎問(wèn)盤(pán)相同區(qū)域未檢測(cè)到相關(guān)免疫陽(yáng)性反應(yīng)細(xì)胞。在髓核中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)免疫陽(yáng)性染色細(xì)胞。 結(jié)論： (1)經(jīng)大鼠尾椎間盤(pán)前方損傷全層纖維環(huán)并將鼠尾反折成U型后，損傷纖維環(huán)很難愈合，早期出現(xiàn)椎間盤(pán)退變。 (2)經(jīng)大鼠尾椎間盤(pán)前方損傷椎間盤(pán)纖維環(huán)并外界施加長(zhǎng)期的應(yīng)力，可以方便的制備椎間盤(pán)纖維環(huán)破裂動(dòng)物模型。