殼聚糖-pGU6-GFP-Neo-shSTA納米粒沉默stathmin基因對肺腺癌細胞化療敏感性的影響.pdf

1、目的：觀察以天然納米材料殼聚糖包裹stathmin基因短發(fā)夾RNA（shRNA）表達質(zhì)粒介導轉染肺腺癌細胞A549,是否增強細胞對化療藥物紫杉醇的敏感性，為殼聚糖納米載基因顆粒在肺腺癌生物學治療中的應用提供依據(jù)。
　　 方法：構建靶向stathmin基因的短發(fā)夾RNA（shRNA）真核表達質(zhì)粒，并酶切、測序鑒定；脂質(zhì)體介導轉染A549細胞，RT-PCR、Western Blot方法檢測該質(zhì)粒對靶基因的沉默效能；采用復凝聚法合成靶

2、向stathmin的殼聚糖-shRNA納米粒；分別以殼聚糖-shRNA納米粒、陽離子脂質(zhì)體基因復合物轉染A549細胞，MTT法檢測細胞對化療藥物紫杉醇敏感性的變化。
　　 結果：成功構建了靶向stathmin基因的shRNA真核表達質(zhì)粒pGU6/GFP/Neo-shSTA；轉染A549細胞后stathmin基因的mRNA、蛋白質(zhì)表達水平較對照組均顯著降低（P<0.05）；成功制備了靶向stathmin的殼聚糖-shRNA納米粒；

3、該納米粒轉染A549細胞后在細胞內(nèi)可檢測到報告基因（GFP）的明顯表達；殼聚糖-shRNA納米粒、陽離子脂質(zhì)體基因復合物轉染A549細胞組與空白對照組相比，半數(shù)抑制率（IC50）均顯著降低（P<0.05)，殼聚糖組降低的程度小于脂質(zhì)體組（P<0.05)。
　　 結論：質(zhì)粒pGU6/GFP/Neo-shSTA能高效靶向沉默stathmin基因的表達；本實驗制備了殼聚糖納米載基因顆粒，成功轉染了A549細胞；靶向stathmin的殼