殼聚糖-pGU6-GFP-Neo-shSTA納米粒沉默stathmin基因?qū)Ψ蜗侔┘?xì)胞化療敏感性的影響.pdf

1、目的：觀察以天然納米材料殼聚糖包裹stathmin基因短發(fā)夾RNA（shRNA）表達(dá)質(zhì)粒介導(dǎo)轉(zhuǎn)染肺腺癌細(xì)胞A549,是否增強(qiáng)細(xì)胞對(duì)化療藥物紫杉醇的敏感性，為殼聚糖納米載基因顆粒在肺腺癌生物學(xué)治療中的應(yīng)用提供依據(jù)。
　　 方法：構(gòu)建靶向stathmin基因的短發(fā)夾RNA（shRNA）真核表達(dá)質(zhì)粒，并酶切、測(cè)序鑒定；脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞，RT-PCR、Western Blot方法檢測(cè)該質(zhì)粒對(duì)靶基因的沉默效能；采用復(fù)凝聚法合成靶

2、向stathmin的殼聚糖-shRNA納米粒；分別以殼聚糖-shRNA納米粒、陽(yáng)離子脂質(zhì)體基因復(fù)合物轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞，MTT法檢測(cè)細(xì)胞對(duì)化療藥物紫杉醇敏感性的變化。
　　 結(jié)果：成功構(gòu)建了靶向stathmin基因的shRNA真核表達(dá)質(zhì)粒pGU6/GFP/Neo-shSTA；轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞后stathmin基因的mRNA、蛋白質(zhì)表達(dá)水平較對(duì)照組均顯著降低（P<0.05）；成功制備了靶向stathmin的殼聚糖-shRNA納米粒；

3、該納米粒轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞后在細(xì)胞內(nèi)可檢測(cè)到報(bào)告基因（GFP）的明顯表達(dá)；殼聚糖-shRNA納米粒、陽(yáng)離子脂質(zhì)體基因復(fù)合物轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞組與空白對(duì)照組相比，半數(shù)抑制率（IC50）均顯著降低（P<0.05)，殼聚糖組降低的程度小于脂質(zhì)體組（P<0.05)。
　　 結(jié)論：質(zhì)粒pGU6/GFP/Neo-shSTA能高效靶向沉默stathmin基因的表達(dá)；本實(shí)驗(yàn)制備了殼聚糖納米載基因顆粒，成功轉(zhuǎn)染了A549細(xì)胞；靶向stathmin的殼