組織工程化生物角膜構建方法的比較研究.pdf

1、目的：探討構建組織工程化生物角膜更有效、更方便的方法。方法1.以組織塊培養(yǎng)法、酶消化法擴增的角膜緣干細胞為種子細胞，以去上皮羊膜、板層角膜切削刀制作的異種角膜基質(zhì)和高分子材料PET為載體，利用細胞培養(yǎng)池體外構建板層角膜組織，通過HE染色、掃描電鏡、透射電鏡等觀察構建組織的形態(tài)結構，檢驗細胞培養(yǎng)池條件下進行構建板層生物角膜的可能性；2.以組織塊培養(yǎng)法擴增的角膜緣干細胞為種子細胞，以高分子材料PET為載體，利用細胞培養(yǎng)池、灌注培養(yǎng)系統(tǒng)、旋轉(zhuǎn)

2、培養(yǎng)系統(tǒng)體外構建板層生物角膜，并通過HE染色、Hoechst33342、Propidiumiodide熒光染色、掃描電鏡、透射電鏡等觀察所構建組織的細胞排列方式與形態(tài)結構；免疫組化、RT-PCR檢測所構建組織的p63及K3/K12表達；pH計測定三種培養(yǎng)系統(tǒng)培養(yǎng)液pH值的變化，比較三種構建方法的條件穩(wěn)定性、及所構建組織的差別。結論：1.原代或早代細胞較適合選作種子細胞，用于角膜組織構建，組織塊培養(yǎng)法比酶消化法擴增角膜緣干細胞的效率更高；

3、2.去上皮羊膜、MLK刀制作的板層角膜基質(zhì)、PET膜適合作為構建角膜的載體；3.細胞培養(yǎng)池具有透明的PET膜，多孔的結構保證營養(yǎng)物質(zhì)自由通過，在構建角膜組織時可以較好地模擬體內(nèi)微環(huán)境；4.細胞培養(yǎng)池、灌注培養(yǎng)系統(tǒng)、旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)系統(tǒng)三種方法均可構建出健康的復層角膜上皮組織，構建組織K3/K12的mRNA、蛋白質(zhì)表達差別不大，但是細胞排列方式，細胞與載體結合的緊密程度存在差別；5.灌注培養(yǎng)、旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)過程中切應力對于構建組織的細胞骨架的影響，構建