豬傳染性胸膜肺炎型特異性間接ELISA的建立與應(yīng)用.pdf

1、豬傳染性胸膜肺炎(PorcinePleuropneumonia)是由胸膜肺炎放線桿菌(ActinobacillusPleuropneumoniae，APP)引起的一種常見(jiàn)的呼吸道傳染病，各年齡的豬只均可感染。豬群感染胸膜肺炎放線桿菌后，當(dāng)遇到氣候環(huán)境突變，通風(fēng)不良等應(yīng)激因素時(shí)，豬只抵抗力下降，可誘發(fā)本病，主要表現(xiàn)為精神沉郁，體溫升高，呼吸困難等臨床癥狀，并出現(xiàn)特征性的出血性肺炎和胸膜炎。本病在世界各養(yǎng)豬國(guó)家普遍存在，近年來(lái)，流行日趨嚴(yán)重

2、，成為大規(guī)模養(yǎng)豬的五大疫病之一。 采用酚—水法制備血清3型、4型、5型、7型和8型豬胸膜肺炎放線桿菌(APP)脂多糖(LPS)，以該多糖免疫小白鼠，進(jìn)行同源攻毒保護(hù)試驗(yàn)，結(jié)果LPS在20μg/只的免疫劑量下可對(duì)小白鼠產(chǎn)生較強(qiáng)的保護(hù)作用，用同血清型菌株對(duì)免疫后的小白鼠攻毒，僅表現(xiàn)肺臟輕微出血，無(wú)死亡，而對(duì)照組未經(jīng)免疫直接攻毒的小白鼠全部死亡，肺臟嚴(yán)重出血，上述結(jié)果表明LPS是APP的主要免疫保護(hù)性抗原之一，該研究為APP亞單位疫苗

3、的研制及應(yīng)用提供了理論依據(jù)。 將提純的血清5型和7型APP脂多糖作為包被抗原，包被后37℃1h轉(zhuǎn)入4℃過(guò)夜包被效果較好；封閉后以37℃1h、血清加入后以37℃1h、酶標(biāo)抗體加入后以37℃1h反應(yīng)，效果較為理想，依此建立起血清5型和7型APP型特異性間接ELISA檢測(cè)方法。用血清5型APP型特異性間接ELISA方法檢測(cè)攻毒小鼠血清抗體，除發(fā)病后第2d、第3d死亡的2只未檢出抗體外，其余33只至死亡前檢測(cè)結(jié)果全部為陽(yáng)性，檢出率94.

4、3％；用血清7型APP型特異性間接ELISA方法檢測(cè)攻毒小鼠血清抗體除發(fā)病后第2d、第3d死亡的3只未檢出抗體外，其余32只至死亡前檢測(cè)結(jié)果全部為陽(yáng)性，檢出率91.4％。用血清5型和7型LPS包被酶標(biāo)反應(yīng)板，用其他血清型的陽(yáng)性血清進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)OD值都小于0.050，結(jié)果均為陰性，沒(méi)有交叉反應(yīng)。用血清5型和7型APP型特異性間接ELISA方法分別對(duì)6份血清在不同時(shí)間相同條件下檢測(cè)3次，判定結(jié)果完全相同，以上研究表明該方法具有很高的敏感性