RCS大鼠病變發(fā)展過程中視網膜神經節(jié)細胞形態(tài)學研究.pdf

1、目的皇家外科學院大鼠(Royalcollegeofsurgeonrat，RCS)為遺傳性視網膜色素變性的經典動物模型。視網膜神經節(jié)細胞(retinalganglioncells，RGCs)是視網膜內唯一向高級視覺中樞投射信號的神經元。研究RGCs在RCS大鼠病變發(fā)展過程中的變化，對進一步認識視網膜色素變性疾病的發(fā)病機理和病變過程有積極的作用。國內外沒有分類研究RCS大鼠病變發(fā)展過程中RGCs形態(tài)學改變的研究報道。本實驗對出生后RCS大鼠

2、病變發(fā)展過程中不同周齡的RGCs進行分類計數(shù)比較并對RGCs細胞超微結構的改變進行了比較研究，初步探討病變發(fā)展過程中其RGCs在形態(tài)學上的變化特性，加深對視網膜變性疾病發(fā)病機制的認識。 方法取出生后3、4、5、6、7、8、9、10、11、12周齡RCS大鼠和對照組大鼠，每周齡各3只，剝離視網膜，固定后行視網膜平鋪片，甲酚紫染色，使用LEICADMTRET顯微鏡及自帶的LEICAQWIN系統(tǒng)軟件進行對比分析。按照節(jié)細胞層全部細胞，

3、節(jié)細胞層中細胞橫徑，細胞橫徑≥9μm三種標準，分別觀察和計數(shù)RCS大鼠和對照組大鼠視網膜節(jié)細胞層細胞密度上的變化。通過透射電鏡觀測分析生后3、5、7、9、11周齡RCS大鼠和對照組大鼠視網膜神經節(jié)細胞超微結構的改變，并對RCS大鼠和對照組大鼠視網膜神經節(jié)細胞中腫脹線粒體進行了計數(shù)和比較。 結果1、視網膜節(jié)細胞層全部細胞的密度上，RCS大鼠和對照組在各年齡段之間沒有顯著差異。Rcs大鼠自身前后年齡段對照發(fā)現(xiàn)，其生后5、6周齡段密度

4、上相較于生后3周齡段有顯著性下降。其余各周齡段間沒有顯著性差異。 2、視網膜神經節(jié)細胞的密度比較上，RCS大鼠生后10周齡的節(jié)細胞密度比對照組生后10周齡有顯著增加，其余各周齡間比較兩者沒有顯著差異。RCS大鼠自身前后比較，其生后10周齡神經節(jié)細胞密度顯著高于其生后3、5、6、11周齡，其余個周齡之間比較沒有顯著差異。 3、α亞型及部分亞型的視網膜神經節(jié)細胞密度的比較，RCS大鼠從生后4周齡起后的各周齡都顯著少于對照組，

5、并在7周齡后此差異更為明顯。RCS大鼠自身前后對照，從生后7周齡開始α亞型及部分β和γ亞型的視網膜神經節(jié)細胞密度顯著低于正常的細胞密度。 4、透射電鏡對RCS大鼠和對照組大鼠節(jié)細胞的細胞超微結構的分析。RCS大鼠在病變發(fā)展過程中RGCs細胞中的核仁和內質網系統(tǒng)依然能夠保持正常的形態(tài)，與對照組大鼠相比較兩者間未見差異。在病變的發(fā)展過程中RCS大鼠的RGCs細胞超微結構中線粒體腫脹程度呈現(xiàn)明顯的增加趨勢。RCS大鼠線粒體腫脹程度從生

6、后5、7、9、11周齡均顯著高于對照組。RCS大鼠自身前后對照可以發(fā)現(xiàn)，從生后5周齡開始后的各周齡其線粒體腫脹程度即顯著高于生后3周齡。 結論采用視網膜平鋪片及甲酚紫染色，通過LEICADMTRET倒置顯微鏡和電腦計數(shù)軟件對視網膜節(jié)細胞層神經元進行分析，以及在透射電鏡下觀察節(jié)細胞超微結構，我們得到以下結論： 1.RCS大鼠視網膜色素變性的病變發(fā)展過程中，視網膜節(jié)細胞層神經元在膠質細胞增生和異位細胞遷入的情況下，能夠保持整

7、體密度上的穩(wěn)定。 2.RCS大鼠視網膜色素變性的病變發(fā)展過程中，視網膜中α亞型的神經節(jié)細胞及部分β和γ亞型的神經節(jié)細胞從睜眼后不久即開始出現(xiàn)細胞密度和細胞超微結構上的改變，并在生后7周齡時這個變化加劇，出現(xiàn)了大量節(jié)細胞的缺失。 3.透射電鏡觀察節(jié)細胞超微結構發(fā)現(xiàn)RCS大鼠的核仁和內質網系統(tǒng)在病變發(fā)展過程中其形態(tài)學結構沒有出現(xiàn)變化，但是其線粒體腫脹程度隨著視網膜色素變性疾病的發(fā)展不斷增加，并與視網膜節(jié)細胞密度出現(xiàn)下降的時間