GRIM-19對結(jié)腸癌凋亡及化療敏感性影響的研究.pdf

1、背景和目的： 轉(zhuǎn)錄信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子與激活子3（signal transducers and activators of transcription 3，STAT3）及其介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖，凋亡與分化，并介導(dǎo)細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化，體內(nèi)外阻斷（或抑制）某些腫瘤細(xì)胞中STAT3信號通路，可誘導(dǎo)瘤細(xì)胞凋亡，并抑制瘤細(xì)胞生長和存活。近期發(fā)現(xiàn)的干擾素(Interferon，IFN)/維甲酸(retinoid，RA)聯(lián)合應(yīng)用誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡

2、相關(guān)的基因GRIM-19(Genes associated with Retinoid-Interferon induced Mortality 19，GRIM-19)，屬STAT3特異性抑制蛋白，本研究旨在構(gòu)建攜帶GRIM-19基因的腺病毒并探討Grim-19對結(jié)腸癌凋亡及化療敏感性影響。 方法： 以pcxn2-Grim19 重組質(zhì)粒為模板，PCR擴增Grim19，將Grim19 cDNA克隆于穿梭質(zhì)粒pAdTrack

3、-CMV，PmeI線性化后，與腺病毒骨架質(zhì)粒pAdEasy-1共轉(zhuǎn)化BJ5183感受態(tài)細(xì)胞，獲得帶有Grim19基因的重組腺病毒質(zhì)粒Ad-Grim19,并酶切鑒定后，經(jīng)PacI線性化后轉(zhuǎn)染HEK293包裝細(xì)胞，觀察細(xì)胞內(nèi)綠色熒光蛋白表達(dá)情況，并進行3輪擴增，收獲腺病毒重組病毒子。將重組腺病毒Ad-Grim19轉(zhuǎn)染sw480細(xì)胞并通過流式細(xì)胞技術(shù)檢測其凋亡表現(xiàn)。Pcxn2-GRIM19與pcxn2-STAT3質(zhì)粒在脂質(zhì)體lipofecta

4、mine2000的介導(dǎo)下轉(zhuǎn)染結(jié)腸癌細(xì)胞sw480，通過蛋白Western Blot分析GRIM19在sw480細(xì)胞中的表達(dá)情況；利用流式細(xì)胞術(shù)檢測GRIM19對細(xì)胞凋亡的影響；GRIM19與順鉑聯(lián)合應(yīng)用后分析sw480細(xì)胞凋亡表現(xiàn)及bcl-xl蛋白的表達(dá)情況。 結(jié)果： 經(jīng)酶切鑒定重組腺病毒Ad-Grim19構(gòu)建成功，熒光表現(xiàn)表明Ad-Grim19在HEK293包裝細(xì)胞中表達(dá)；重組腺病毒pAd-Grim19轉(zhuǎn)染sw480細(xì)