肝素聯(lián)合尿激酶對無心跳供體肺保護(hù)的作用研究.pdf

1、目的： 利用套管法大鼠原位肺移植的模型，研究在無心跳供體肺移植中供體肺經(jīng)過一段時(shí)間(30分鐘)熱缺血后，在灌注液中加入尿激酶能否溶解供肺微血栓，改善移植肺的功能；同時(shí)研究在供體循環(huán)停止15分鐘后使用肝素，能否通過胸外心臟按壓的方法使之到達(dá)肺部，與尿激酶聯(lián)合作用進(jìn)一步加強(qiáng)供體肺保護(hù)的效果。 方法： 清潔級成年雄性SD大鼠按隨機(jī)的原則分為四組，分別為肝素+尿激酶組(A組)、肝素組(B組)、尿激酶組(C組)、空白組(D

2、組)，每組10只(供、受體大鼠各5只)。 供體大鼠經(jīng)下腔靜脈給與10％氯化鉀處死，氣管切開，插入16＃靜脈留置針套管，連接動(dòng)物呼吸機(jī)，暫不輔助呼吸。A組15分鐘后再經(jīng)下腔靜脈給予肝素(濃度為200U/ml)2，000U/kg，這時(shí)開始胸外按壓輔助循環(huán)，同時(shí)機(jī)械通氣。5分鐘后剪斷腹主動(dòng)脈放血，正中剪開胸骨，左肺動(dòng)脈、左肺靜脈分別置入18＃、16＃靜脈留置針套管，結(jié)扎固定，自左肺動(dòng)脈灌注尿激酶15，000U/kg(生理鹽水配成15m

3、l)，灌注壓15-20cmH2O。灌注完畢后繼續(xù)予4℃生理鹽水正灌+逆灌直至流出液無血液，供肺顏色變蒼白，然后切取左肺保存在4℃LPD液中。B組將尿激酶替換成等量的生理鹽水，C組將肝素替換成等量的生理鹽水，D組將肝素和尿激酶均換成等量的生理鹽水，其他實(shí)驗(yàn)步驟基本同A組。 受體肺移植后觀察90分鐘，期間測PaO2、 PaCO2、 pAwP；90分鐘后處死受體，獲取移植的左肺，肺組織檢測ATPase活力、髓過氧化酶(MPO)、細(xì)胞間

4、粘附分子-1(ICAM-1)、NF-κ B p65含量及濕/干重比，光鏡下觀察供肺組織形態(tài)學(xué)改變。 結(jié)果： 1、本實(shí)驗(yàn)流程進(jìn)行順利，各個(gè)受體存活時(shí)間均達(dá)到90分鐘。 2、血?dú)夥治觯阂浦埠箅S著時(shí)間的推移，各組PaO2都有所降低，A組在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)上均高于B、C、D三組。在移植后30min時(shí)PaO2差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；在60min時(shí)A組與B、C組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但A組與D組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；在90m

5、in時(shí)A組與B、C、D三組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；移植后隨著時(shí)間的推移，各組PCO2都有所上升，B、C、D三組在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)上均高于A組，在移植后30min時(shí)PCO2差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；在60min時(shí)B、C組與A組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但A組與D組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；在90min時(shí)A組與B、C、D三組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。 3、氣道峰壓(pAwP)測定：肺移植后pAwP均呈上升趨勢，A組在各個(gè)

6、時(shí)間點(diǎn)上均低于B、C、D三組。在移植后30min時(shí)pAwP差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；在60min時(shí)A組與B、C組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但A組與D組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；在90min時(shí)A組與B、C、D三組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 4、肺組織濕/干重比：與D組比，A、B、C三組濕/干重比均下降，A組降低最明顯，與D組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)；同時(shí)，A組與B、C組比，差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05； p<0.

7、01)。 5、肺組織ATPase活力：與D組比，A、B、C三組ATPase均升高，A組上升最明顯，與D組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)；同時(shí)，A組與B、C組比，差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05； p<0.05)。 6、肺組織MPO活性、ICAM-1、NF-κ B p65含量測定：與D組比，A、B、C三組MPO活性、ICAM-1、NF-κ B p65均下降，A組降低最明顯，與D組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)；

8、同時(shí)，A組與B、C組比，差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05；p<0.05)。 7、肺組織的病理變化：4組均有不同的病理學(xué)損害，D組肺組織損傷嚴(yán)重，肺間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤，肺泡腔內(nèi)紅細(xì)胞蓄積嚴(yán)重；B、C組病理改變稍輕，但肺泡腔內(nèi)仍有較多的紅細(xì)胞蓄積；A組病理改變最輕，肺泡腔內(nèi)無明顯紅細(xì)胞蓄積。 結(jié)論： 1.無心跳供體肺離體灌注期間，在灌注液中加入尿激酶，可通過溶解肺循環(huán)內(nèi)的血栓，增加氧合，從而改善移植肺的功能。