

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)
文檔簡介
1、研究背景:
進入二十一世紀以來,人類對于編碼RNA的研究已經(jīng)較為深入,但對于完全解決疾病來講還遠遠不夠。隨著非編碼RNA進入人們的視野,這類以往被認為無任何作用的“暗物質(zhì)”給大家?guī)砹恕绑@喜”。它們通過直接或間接調(diào)控編碼RNA,影響基因、蛋白質(zhì)的功能,從而發(fā)揮重要的生物學功能。近年來,隨著生物信息學技術(shù)的發(fā)展,利用高通量生物芯片技術(shù)研究疾病的病因、診斷、治療,已經(jīng)成為一種新型的研究方法,在臨床與基礎(chǔ)研究中的應(yīng)用越來越廣泛。我科
2、以往研究發(fā)現(xiàn):嚴重燒傷后高代謝表現(xiàn)為骨骼肌消耗,而且脛骨前肌消耗較為顯著,且發(fā)現(xiàn)燙傷后大鼠在第3天開始即出現(xiàn)脛骨前肌消耗,7天最為明顯,在蛋白水平、基因水平和信號通路方面進一步研究發(fā)現(xiàn):泛素-蛋白酶體介導的蛋白降解、骨骼肌細胞凋亡、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激等是燒傷后骨骼肌消耗的重要原因。但略顯不足的是,在非編碼RNA的表觀遺傳學調(diào)控方面的機制尚未進行研究。
目的:
本研究擬通過高通量芯片篩選嚴重燙傷大鼠早期脛骨前肌非編碼RNA表達
3、譜的改變,應(yīng)用生物信息學分析方法,深入挖掘芯片數(shù)據(jù)提供的信息,發(fā)現(xiàn)其可能的致病機制,為臨床治療提供新的靶點和途徑。本課題擬進行以下三部分研究:
(1)觀察嚴重燙傷早期大鼠脛骨前肌消耗改變
(2)篩選大鼠嚴重燙傷早期脛骨前肌微小RNA表達譜并進行生物信息學分析
(3)篩選嚴重燙傷大鼠早期脛骨前肌長鏈非編碼RNA表達譜并進行生物信息學分析
方法:
(1)采用雄性Wistar大鼠制備燙傷大鼠模
4、型,實驗組大鼠采用94℃熱水、12s造成大鼠背部30%TBSA三度燙傷,對照組大鼠采用37℃溫水(其余條件同實驗組)。分別于傷后1d、3d、7d、14 d(n=8)麻醉處死大鼠,分離獲取脛骨前肌,稱量肌肉重量。原位末端轉(zhuǎn)移酶標記(TUNEL)法測定脛骨前肌細胞凋亡。同時留取脛骨前肌標本用于微小RNA和長鏈非編碼RNA的檢測。
(2)采用丹麥鎖核苷酸技術(shù)Exiqon miRCURY? LNA microRNA芯片(第七代),約7
5、00條捕獲探針,數(shù)據(jù)庫版本為v18.0,檢測(1)中留取的實驗組與對照組中傷后3天的脛骨前肌標本(n=4),對部分差異microRNAs進行實時定量PCR驗證以檢驗芯片數(shù)據(jù)的可靠性;對篩選出的部分差異 microRNAs進行靶基因預(yù)測、聚類分析、基因功能分析(GO analysis)、信號通路分析(Pathway)等生物信息學分析,對部分。
(3)采用Arraystar公司Rat LncRNA Array(4x44K, Arr
6、aystar)大鼠長鏈非編碼RNA芯片,設(shè)計包括LncRNAs和蛋白編碼基因,約來自于NCBI RefSeq數(shù)據(jù)庫的9000個lncRNAs和UCSC數(shù)據(jù)庫的約15000個mRNA。檢測(1)留取的實驗組與對照組中傷后3天的脛骨前肌標本(n=3),對部分差異LncRNAs進行實時定量PCR驗證以檢驗芯片數(shù)據(jù)的可靠性;對篩選出的差異 LncRNAs進行基因功能分析(GO analysis)、信號通路分析(Pathway)、CNC網(wǎng)絡(luò)分析等
7、生物信息學分析。
結(jié)果:
(1)在相同時間點和對照組相比,脛骨前肌重量及其與體重比值在嚴重燙傷大鼠傷后3d即出現(xiàn)下降,7d下降達到最低;體現(xiàn)出明顯的骨骼肌消耗狀態(tài)。傷后燙傷大鼠脛骨前肌細胞凋亡增加。
(2)燙傷組與對照組相比,共有69種miRNA呈現(xiàn)差異表達,其中升高的miRNA有4種,降低的miRNA有65種;經(jīng)過GO分析顯示,參與代謝過程相關(guān)的miRNA包括6種,參與生物調(diào)節(jié)相關(guān)的miRNA包括5種。P
8、ATHWAY分析顯示關(guān)系密切的研究通路有P53信號通路、凋亡信號通路、PI3K/Akt信號通路等。
(3)長鏈非編碼RNA芯片數(shù)據(jù)顯示,從約15000個大鼠mRNAs中檢測實驗組與對照組之間的差異mRNAs,發(fā)現(xiàn)實驗組與對照組相比,顯著升高的共有93個,而降低的則有110個。從約9000個大鼠 lncRNAs中檢測實驗組與對照組之間的差異lncRNAs,發(fā)現(xiàn)實驗組與對照組相比,升高的共有64個,而降低的則有53個,且倍數(shù)大于1
9、.5(P<0.05)。GO分析顯示生物過程的負調(diào)控、補體激活的經(jīng)典途徑、電壓門控氯離子通道活性等多種功能與長鏈非編碼RNA相關(guān)。PATHWAY分析顯示胰島素信號通路、T細胞受體信號通路等信號通路可能受到長鏈非編碼RNA調(diào)控。
結(jié)論:
(1)大鼠嚴重燙傷后早期脛骨前肌microRNAs表達譜產(chǎn)生改變,且生物信息學分析 microRNAs可能主要參與了調(diào)控代謝過程、生物調(diào)節(jié)等多種功能,并參與 P53信號通路、凋亡信號通路
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 非編碼RNA的生物信息學研究.pdf
- 耐輻射球菌中串聯(lián)重復(fù)序列以及非編碼RNA的生物信息學分析.pdf
- 胎兒與成人心肌中l(wèi)ncRNA的差異表達及其生物信息學分析.pdf
- 食管鱗癌表達譜數(shù)據(jù)的挖掘和生物信息學分析.pdf
- 棉花纖維發(fā)育相關(guān)基因時空表達及其生物信息學分析.pdf
- 地黃RAPD-SCAR標記及其生物信息學分析.pdf
- 錳致大鼠神經(jīng)元中l(wèi)ncRNA與mRNA表達譜的改變及其生物信息學的分析.pdf
- 煙草碳酸酐酶基因的克隆及其生物信息學分析.pdf
- 非負矩陣分解及其生物信息學應(yīng)用.pdf
- 高氧誘導支氣管肺發(fā)育不良差異表達長鏈非編碼RNA的篩選及生物信息學分析.pdf
- 播娘蒿抗寒基因COR的克隆及其生物信息學分析與表達研究.pdf
- 耐熱木聚糖酶的體外分子進化及其生物信息學分析.pdf
- 22723.干細胞表達譜的生物信息學與系統(tǒng)生物學分析
- 軟骨發(fā)生過程中基因表達譜的測定及生物信息學分析.pdf
- myc基因的生物信息學分析
- 小鼠肺組織鉤蟲感染時間序列基因表達譜的生物信息學分析.pdf
- 肝癌易感相關(guān)基因及組織基因表達譜生物信息學分析.pdf
- 25850.雞fatp1基因cdna的克隆、組織表達及其生物信息學分析
- L02-HBx細胞長鏈非編碼RNA的表達譜分析及初步生物信息學研究.pdf
- 微小RNA miR-449a在不同分子亞型乳腺癌中的表達及生物信息學分析.pdf
評論
0/150
提交評論