改良ALT和AST參考方法的建立、評價(jià)及應(yīng)用.pdf

1、1.研究意義與目的 檢驗(yàn)結(jié)果的互認(rèn)是當(dāng)前臨床實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理中的研究熱點(diǎn)之一。互認(rèn)的基礎(chǔ)是檢驗(yàn)結(jié)果具有可比性，而檢測結(jié)果只有直接或間接地溯源到參考方法和或參考物質(zhì)，才能保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和不同實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果具有可比性。ALT和AST是臨床實(shí)驗(yàn)室血清酶學(xué)測定中非常重要的常規(guī)項(xiàng)目，其測定的準(zhǔn)確性直接影響到肝臟疾病的診斷、治療和預(yù)后。目前國內(nèi)臨床實(shí)驗(yàn)室血清酶測定大多采用非配套檢測系統(tǒng)，即大多采用進(jìn)口儀器和校準(zhǔn)品，但試劑為國產(chǎn)試劑，或改

2、變配套檢測系統(tǒng)的檢驗(yàn)程序，致使校準(zhǔn)品喪失溯源性，導(dǎo)致不同檢測系統(tǒng)或方法的檢驗(yàn)結(jié)果存在較大差異，缺乏可比性。而且國產(chǎn)ALT和AST試劑幾乎全是不含磷酸吡哆醛的，而IFCC公布的37℃條件下ALT和AST的參考方法中是含有磷酸吡哆醛的。鑒于此，本研究將參照IFCC推薦的參考方法，建立不含磷酸吡哆醛的改良ALT和AST參考方法，并對初步建立的改良ALT和AST參考方法進(jìn)行方法學(xué)性能評價(jià)，了解其各項(xiàng)性能指標(biāo)。同時(shí)用建立的改良ALT和AST參考方

3、法對制備的酶校準(zhǔn)品進(jìn)行賦值，然后用賦值的酶校準(zhǔn)品校準(zhǔn)各實(shí)驗(yàn)室開放系統(tǒng)，評價(jià)校準(zhǔn)前后各系統(tǒng)與參考方法間測定結(jié)果的偏倚，同時(shí)了解不同實(shí)驗(yàn)室間ALT和AST測定結(jié)果的可比性以及非新鮮血清樣本的基質(zhì)效應(yīng)。 2.方法 參照IFCC公布的37℃條件下ALT和AST一級參考測量程序相關(guān)文件，建立本研究不含磷酸吡哆醛的改良ALT和AST參考方法。根據(jù)美國國家實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會（CLSI）系列文件（EP5-A2、EP15-A、EP6-A）對

4、建立的改良參考方法的精密度、正確度、線性范圍等性能進(jìn)行評價(jià)。使用初步建立的改良ALT和AST參考方法對新鮮血清進(jìn)行定值，用此定值的新鮮血清作為校準(zhǔn)品校準(zhǔn)廣州地區(qū)10家實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)檢測系統(tǒng)。用改良參考方法和常規(guī)檢測系統(tǒng)同時(shí)檢測7份能力驗(yàn)證盲樣、4份市售制備物和5份新鮮血清，比較校準(zhǔn)前后測定結(jié)果間的偏倚，比較常規(guī)方法與參考方法間基于不同基質(zhì)（人血清與質(zhì)控血清）的偏倚差異，進(jìn)行檢驗(yàn)結(jié)果的可比性和基質(zhì)效應(yīng)的評價(jià)。 3.結(jié)果 紫外

5、分光光度計(jì)、分析天平、pH計(jì)、電子溫度計(jì)、移液器和容量瓶均檢定合格，不確定度符合方法要求。溫控器顯示為37．2℃時(shí)，比色杯內(nèi)溶液溫度最接近37℃；比色杯內(nèi)溶液180秒后可達(dá)到設(shè)定溫度；移液器加樣模式實(shí)驗(yàn)顯示吸一檔打兩檔，打時(shí)靠壁為精密度最佳的加樣模式。改良ALT和AST參考方法的批內(nèi)不精密度均<1％，總不精密度均<2％，符合精密度性能要求；檢測日本臨床化學(xué)會酶參考品結(jié)果均在其不確定度允許范圍內(nèi)，cfas各濃度測定結(jié)果與靶值基本一致，參加

6、參考實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)賦值計(jì)劃測定結(jié)果與均值比較在等效限內(nèi)。改良ALT和AST參考方法分析測量范圍上限分別為335．8U/L和363．6U/L。校準(zhǔn)前ALT和AST新鮮血清測定結(jié)果與參考方法測定結(jié)果之間偏倚大于20％的所有11個(gè)測定結(jié)果中，有10個(gè)測定結(jié)果來源于用理論K值計(jì)算酶活性的檢測系統(tǒng)；校準(zhǔn)前新鮮血清組ALT和AST的最大偏倚分別為-29．2％和-25．0％，平均偏倚分別為10．7％和9．3％；使用改良參考方法定值的酶校準(zhǔn)品校準(zhǔn)后，最大偏

7、倚分別降為15．2％和12．3％，平均偏倚分別降為3．4％和2．1％。ALT結(jié)果中1種能力驗(yàn)證盲樣對所有檢測系統(tǒng)都表現(xiàn)基質(zhì)效應(yīng)，AST結(jié)果中2種能力驗(yàn)證盲樣對所有檢測系統(tǒng)無基質(zhì)效應(yīng)，其他樣品視系統(tǒng)的不同而表現(xiàn)出不同的情況。 4.結(jié)論 改良ALT和AST參考方法已基本建立。精密度、準(zhǔn)確度及線性范圍等性能指標(biāo)均符合方法要求。應(yīng)用本改良參考方法定值的新鮮血清作為校準(zhǔn)品進(jìn)行校準(zhǔn)是實(shí)現(xiàn)不同檢測系統(tǒng)檢驗(yàn)結(jié)果一致性和可比性的有效途徑，