代謝信號(hào)對(duì)犢牛脂肪細(xì)胞脂聯(lián)素、激素敏感脂肪酶基因表達(dá)的影響.pdf

1、為了探討代謝信號(hào)對(duì)奶牛脂肪細(xì)胞脂聯(lián)素和激素敏感脂肪酶的影響，在體外單層培養(yǎng)13d的犢牛的成熟脂肪細(xì)胞中，添加不同梯度濃度的胰島素(0、5、10、20、50、100nmol/L)、胰高血糖素(0、25、100、200、500、1000pg/mL)、葡萄糖(0、5、10、15、20、25 mmol/L)；體外培養(yǎng)3d的犢牛小網(wǎng)膜脂肪組織中添加不同梯度濃度的非酯化脂肪酸(0、0.5、1.0、1.5mmol/L)并設(shè)置三個(gè)重復(fù)，添加后24h提細(xì)

2、胞總RNA，通過(guò)熒光定量PCR技術(shù)，觀測(cè)這些不同梯度濃度的幾種代謝信號(hào)對(duì)牛脂肪細(xì)胞ADPNmRNA與HSLmRNA豐度的影響。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：①ADPN基因的表達(dá)隨著添加的胰島素濃度增長(zhǎng)而減少。5nmol/L、10 nmol/L濃度的胰島素抑制ADPN基因的表達(dá)但差異不顯著(P>0.05)，濃度為20nmol/L的胰島素顯著抑制ADPN基因的表達(dá)(P<0.05)，而當(dāng)胰島素濃度達(dá)到50nmol/L、100nmol/L時(shí)則極顯著的

3、抑制其基因表達(dá)(P<0.01)。HSL 基因的表達(dá)也隨著添加的胰島素濃度增長(zhǎng)而減少。添加5nmol/L和10 nmol/L的胰島素組雖抑制了HSL 基因表達(dá)，但與對(duì)照組相比較，其差異均不顯著(P>0.05)，其它濃度(20、50、100nmol/L)的胰島素均極顯著的抑制 HSL 基因表達(dá)(P<0.01)；②胰高血糖素促進(jìn)ADPN與HSL基因的表達(dá)(P<0.05)，當(dāng)添加濃度為200 pg/mL 或小于此濃度時(shí)與對(duì)照組比較差異不顯著。當(dāng)

4、胰高血糖素濃度為500 pg/mL和1000 pg/mL時(shí)極顯著的促進(jìn)ADPN基因的表達(dá)(P<0.01)。25 pg/mL濃度或以上濃度梯度(100、200、500、1000pg/mL)的胰高血糖素均極顯著的促進(jìn) HSL 基因表達(dá)(P<0.01)；③5mmol/L濃度的葡萄糖顯著抑制ADPN基因的表達(dá)(P<0.05)，其它梯度濃度(10、15、20、25 mmol/L)的葡萄糖均極顯著的抑制 ADPN基因的表達(dá)(P<0.01)。20 m

5、mol/L、25mmol/L濃度的葡萄糖顯著(P<0.05)促進(jìn)HSL基因的表達(dá)，其它濃度(5、10、15mmol/L)的葡萄糖對(duì)促進(jìn)HSL 基因表達(dá)不顯著(P>0.05)；④0.5mmol/L濃度的NEFA雖然促進(jìn)了ADPN基因的表達(dá)，但其差異不顯著(P>0.05)，當(dāng)NEFA達(dá)到1.0mmol/L濃度時(shí)它對(duì)ADPN的基因表達(dá)有顯著的促進(jìn)作用(P<0.05)，當(dāng)NEFA濃度為1.5mmol/L時(shí)它對(duì)ADPN的表達(dá)呈下降趨勢(shì)(P>0.0

6、5)。添加NEFA還有降低脂肪細(xì)胞內(nèi) HSL 拷貝數(shù)(Qty)的趨勢(shì)，但三個(gè)添加組(0.5、1.0、1.5mmol/L)與空白對(duì)照組相比較其差異均不顯著(P>0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：胰島素抑制ADPN、HSL基因表達(dá)，其抑制作用呈劑量依賴性；胰高血糖素促進(jìn)ADPN、HSL 基因表達(dá)，其促進(jìn)作用呈劑量依賴性；葡萄糖抑制ADPN基因表達(dá)，促進(jìn)HSL 基因表達(dá)，其抑制和促進(jìn)作用呈劑量的依賴性；不超過(guò)1.0mmol/L濃度的非酯化脂肪酸促進(jìn)A