瘦素、脂聯(lián)素及其受體與腎上腺腫瘤.pdf

1、第一部分長(zhǎng)型瘦素受體，脂聯(lián)素受體1、脂聯(lián)素受體2在正常腎上腺皮髓質(zhì)和腎上腺皮髓質(zhì)腫瘤中的mRNA表達(dá) 研究目的： 脂肪和腎上腺分泌激素間的關(guān)系密切，脂肪可分泌瘦素、白細(xì)胞介素6等脂肪因子而對(duì)腎上腺分泌功能產(chǎn)生影響。本研究將觀察長(zhǎng)型瘦素受體(Ob-Rb)，脂聯(lián)素受體1(AdipoR1)、脂聯(lián)素受體2(AdipoR2)在正常腎上腺皮、髓質(zhì)和腎上腺皮、髓質(zhì)腫瘤中的mRNA表達(dá)并比較其表達(dá)的差異，以探討腎上腺及其腫瘤組織中瘦素和

2、脂聯(lián)素受體的分布特點(diǎn)。 研究方法： 1．用TRIZOL試劑分別提取人正常腎上腺皮質(zhì)(n=6)、正常腎上腺髓質(zhì)(n=6)、腎上腺皮質(zhì)腺瘤(醛固酮分泌瘤n=14、皮質(zhì)醇分泌瘤n=10)、嗜鉻細(xì)胞瘤(n=20)的組織總RNA； 2．逆轉(zhuǎn)錄后以特異的引物，分別擴(kuò)增Ob-Rb、AdipoR1、AdipoR2、和內(nèi)參照GAPDH； 3．分別計(jì)算目的條帶和內(nèi)參照條帶的灰度比值Ob-Rb/GAPDH、AdipoR1/GA

3、PDH和AdipoR2/GAPDH，并對(duì)其mRNA的表達(dá)進(jìn)行半定量分析，比較每一種目的基因在正常腎上腺皮質(zhì)、髓質(zhì)、醛固酮分泌瘤、皮質(zhì)醇分泌瘤和嗜鉻細(xì)胞瘤之間的表達(dá)差異。 研究結(jié)果： 1．在人正常腎上腺皮質(zhì)(C)、髓質(zhì)(M)、醛固酮分泌瘤(APA)、皮質(zhì)醇分泌瘤(CS)和嗜鉻細(xì)胞瘤(PHEO)組織中均存在Ob-Rb、AdipoR1和AdipoR2 mRNA的表達(dá)。 2． Ob-Rb mRNA在正常腎上腺皮質(zhì)中的表達(dá)

4、明顯高于髓質(zhì)、醛固酮分泌瘤、皮質(zhì)醇分泌瘤和嗜鉻細(xì)胞瘤組織。在醛固酮分泌瘤中的表達(dá)明顯高于皮質(zhì)醇分泌瘤。Ob-Rb/GAPDH在不同組織中的表達(dá)分別為：正常腎上腺皮質(zhì)(0.32±0.12)、髓質(zhì)(0.07±0.03 p<0.01 Vs C)、醛固酮分泌瘤(0.15±0.10 p<0.01 Vs C)、皮質(zhì)醇分泌瘤(0.05±0.02p<0.05 Vs APA，p<0.01 Vs C)和嗜鉻細(xì)胞瘤組織(0.14±0.09)。 3.

5、AdipoR1 mRNA在正常腎上腺皮質(zhì)內(nèi)的表達(dá)明顯低于皮質(zhì)醇分泌瘤和醛固酮分泌瘤，但明顯高于腎上腺髓質(zhì)；在嗜鉻細(xì)胞瘤內(nèi)AdipoR1/GAPDH明顯高于正常腎上腺髓質(zhì)。AdipoR1/GAPDH在不同組織中的表達(dá)分別為：正常腎上腺皮質(zhì)(0.30±0.03)、髓質(zhì)(0.17±0.04 p<0.01 Vs C)、醛固酮分泌瘤(0.58±0.22 p<0.01 Vs c)、皮質(zhì)醇分泌瘤(0.48±0.13 p<0.01 Vs C)和嗜鉻細(xì)胞

6、瘤組織(0.49±0.25 p<0.05 Vs M)。 4. AdipoR2 mRNA正常腎上腺皮質(zhì)內(nèi)的表達(dá)明顯低于皮質(zhì)醇分泌瘤和醛固酮分泌瘤，但明顯高于腎上腺髓質(zhì)。皮質(zhì)醇分泌瘤內(nèi)AdipoR2/GAPDH表達(dá)明顯高于醛固酮分泌瘤。AdipoR2/GAPDH在不同組織中的表達(dá)分別為：正常腎上腺皮質(zhì)(0.41±0.13)、髓質(zhì)(0.20+0.09 p<0.05 Vs c)、醛固酮分泌瘤(0.60+0.17 p<0.05 Vs C)

7、、皮質(zhì)醇分泌瘤(0.84±0.34p<0.05 Vs APA，p<0.05 Vs C)和嗜鉻細(xì)胞瘤組織(0.31±0.12)5. 在良惡性嗜鉻細(xì)胞瘤，腎上腺內(nèi)外嗜鉻細(xì)胞瘤或者家族性與散發(fā)性嗜鉻細(xì)胞瘤間Ob-Rb/GAPDH、AdipoR1/GAPDH、AdipoR2/GAPDH差異均無(wú)顯著性。 結(jié)論： 1. 在人正常腎上腺皮質(zhì)、髓質(zhì)、醛固酮分泌瘤、皮質(zhì)醇分泌瘤和嗜鉻細(xì)胞瘤中均存在不同程度的Ob-Rb、AdipoR1、Ad

8、ipoR2 mRNA的表達(dá)。 2. Ob-Rb mRNA在正常腎上腺皮質(zhì)中的表達(dá)明顯高于醛固酮分泌瘤、皮質(zhì)醇分泌瘤。AdipoR1、AdipoR2 mRNA在醛固酮分泌瘤、皮質(zhì)醇瘤中的表達(dá)要明顯高于正常腎上腺皮質(zhì)，表明瘦素、脂聯(lián)素在腎上腺皮質(zhì)腫瘤中可能具有病理生理作用。 3. AdipoR1 mRNA在嗜鉻細(xì)胞瘤中的表達(dá)明顯高于正常腎上腺髓質(zhì)，其在嗜鉻細(xì)胞瘤發(fā)生中的作用還需要進(jìn)一步研究。 第二部分長(zhǎng)型瘦素受體在正

9、常腎上腺皮髓質(zhì)和腎上腺皮髓質(zhì)腫瘤中的蛋白表達(dá) 研究目的： 前一部分的研究觀察到長(zhǎng)型瘦素受體在腎上腺皮、髓質(zhì)和腎上腺皮、髓質(zhì)腫瘤中均有不同程度的表達(dá)。本部分研究觀察長(zhǎng)型瘦素受體(Ob-Rb)在正常腎上腺皮、髓質(zhì)和腎上腺皮、髓質(zhì)腫瘤中的蛋白表達(dá)并比較其表達(dá)的差異，以從蛋白水平探討不同。腎上腺來(lái)源組織中長(zhǎng)型瘦素受體的分布特點(diǎn)。 研究方法： 1.分別提取人正常腎上腺皮質(zhì)(n=6)、正常腎上腺髓質(zhì)(n=6)、醛固酮

10、分泌瘤(n=10)、皮質(zhì)醇分泌瘤(n=10)、嗜鉻細(xì)胞瘤(n=20)的組織總蛋白； 2.用Western blot方法分別測(cè)定Ob-Rb和內(nèi)參照β-actin； 3.分別計(jì)算目的條帶和內(nèi)參照條帶的灰度比值Ob-Rb/β-actin，并對(duì)其蛋白的表達(dá)進(jìn)行半定量分析。 研究結(jié)果： 1.人正常腎上腺皮質(zhì)、髓質(zhì)、醛固酮分泌瘤、皮質(zhì)醇分泌瘤和嗜鉻細(xì)胞瘤中均存在不同程度的Ob-Rb的蛋白表達(dá)。 2.Ob-Rb

11、蛋白在正常腎上腺皮質(zhì)中的表達(dá)明顯高于腎上腺皮質(zhì)瘤。Ob-Rb蛋白在嗜鉻細(xì)胞瘤中的表達(dá)要明顯高于腎上腺髓質(zhì)。Ob-Rb/β-ACTIN在各種組織間分別是：正常腎上腺皮質(zhì)(1.31±0.26)、醛固酮分泌瘤(0.94±0.23p<0.05 Vs C)、皮質(zhì)醇分泌瘤(0.84±0.32p<0.01 Vs C)。嗜鉻細(xì)胞瘤(0.22±0.09p<0.01 Vs M)和正常腎上腺髓質(zhì)(0.08±0.04p<0.01 Vs C)。 結(jié)論：

12、 1．人正常腎上腺皮質(zhì)、正常腎上腺髓質(zhì)、醛固酮分泌瘤、皮質(zhì)醇分泌瘤和嗜鉻細(xì)胞瘤中均存在不同程度的Ob-Rb的蛋白表達(dá)。 2. Ob-Rb蛋自在正常腎上腺皮質(zhì)、醛固酮分泌瘤和皮質(zhì)醇分泌瘤中有不同的表達(dá)譜，Ob-Rb蛋白在正常腎上腺皮質(zhì)中的表達(dá)明顯高于腎上腺皮質(zhì)瘤。Ob-Rb蛋白在嗜鉻細(xì)胞瘤中的表達(dá)要明顯高于腎上腺髓質(zhì)。結(jié)合mRNA的結(jié)果，提示瘦素在腎上腺皮、髓質(zhì)腫瘤的病理生理方面起一定的作用。 第三部分原發(fā)性醛固酮增

13、多癥、皮質(zhì)醇分泌瘤和嗜鉻細(xì)胞瘤患者的血漿瘦素水平 研究目的： 觀察原發(fā)性醛固酮增多癥(原醛癥)患者和嗜鉻細(xì)胞瘤患者的血清瘦素水平，并與正常人相比，比較其差異，以探討在這一人群中血漿瘦素水平的情況。 研究方法： 1．留取嗜鉻細(xì)胞瘤患者(n=15)，醛固酮分泌瘤患者(n=15)，特發(fā)性醛固酮增多癥患者(n=14)，正常對(duì)照(n=20)和皮質(zhì)醇分泌瘤(n=11)血漿標(biāo)本。 2．用ELISA方法測(cè)定其血漿

14、瘦素水平；對(duì)血漿瘦素水平進(jìn)行分析。 研究結(jié)果： 1．和年齡、體質(zhì)指數(shù)匹配的正常對(duì)照相比，原醛癥患者血漿瘦素水平?jīng)]有明顯差異。醛固酮分泌瘤和特發(fā)性醛固酮增多癥間血漿瘦素水平也沒(méi)有明顯差異。在原醛癥患者中，血漿瘦素與體質(zhì)指數(shù)最為相關(guān)。 2．和年齡、體質(zhì)指數(shù)匹配的正常對(duì)照相比，嗜鉻細(xì)胞瘤患者的血漿瘦素水平?jīng)]有明顯差異，嗜鉻細(xì)胞瘤和正常對(duì)照組的血漿瘦素水平分別是1.61(0.65，3.22)ng/ml和1.16(0.74

15、，4.85)ng/ml。 3．和年齡、體質(zhì)指數(shù)匹配的正常對(duì)照相比，皮質(zhì)醇分泌瘤患者的血漿瘦素水平明顯升高，皮質(zhì)醇分泌瘤和正常對(duì)照組的血漿瘦素水平分別是50.00(31.74，50.00)ng/ml和13.89(7.57，16.69)ng/ml(p<0.01)。 結(jié)論： 和體質(zhì)指數(shù)匹配的正常人相比，皮質(zhì)醇分泌瘤患者的血漿瘦素水平明顯升高，原醛癥和嗜鉻細(xì)胞瘤患者血漿瘦素水平?jīng)]有明顯變化，表明糖皮質(zhì)激素可能促進(jìn)瘦素釋放