大黃素、小檗堿對(duì)HepG2細(xì)胞瘦素受體mRNA表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是一種逐漸被認(rèn)識(shí)的慢性肝臟疾病，包括從單純的肝脂肪變性到非酒精性脂肪性肝炎，以致最終發(fā)展為肝硬化，甚至演變?yōu)楦渭?xì)胞癌。從全球來看，各國(guó)NAFLD的流行都較為嚴(yán)重，并呈上升趨勢(shì)，其對(duì)健康的危害遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過了慢性乙型肝炎病毒感染。研究發(fā)現(xiàn)許多NAFLD患者同時(shí)存在胰島素抵抗(IR)及高濃度瘦素現(xiàn)象。目前所使用的化學(xué)合成藥物雖對(duì)NAFLD具有治療作用，但其對(duì)心血管系統(tǒng)具有嚴(yán)重不良反應(yīng)且長(zhǎng)期使用具有肝毒性，故本

2、實(shí)驗(yàn)采用中藥單體成分大黃素及小檗堿作用于HepG2細(xì)胞，通過觀察它們對(duì)培養(yǎng)液中葡萄糖含量、細(xì)胞內(nèi)糖原含量及HepG2細(xì)胞上瘦素受體mRNA表達(dá)的影響，判斷它們對(duì)IR及高濃度瘦素的改善作用，為臨床上防治NAFLD提供理論依據(jù)。 方法:1用MTT法篩選大黃素、小檗堿作用于HepG2細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)濃度，取細(xì)胞存活率為90％的濃度為試驗(yàn)濃度。 2用游離脂肪酸誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞，同時(shí)分別加入大黃素、小檗堿干預(yù)，并設(shè)正常組、對(duì)照組進(jìn)行比

3、較，通過葡萄糖氧化酶法、蒽酮法、RT—PCR法觀察大黃素、小檗堿對(duì)培養(yǎng)液中葡萄糖含量、細(xì)胞內(nèi)糖原含量及HepG2細(xì)胞上瘦素長(zhǎng)型受體、短型受體mRNA表達(dá)水平的影響，判斷其對(duì)游離脂肪酸誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞產(chǎn)生胰島素抵抗的預(yù)防作用。 3用游離脂肪酸誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞使其成為具有胰島素抵抗的細(xì)胞作為模型組，在模型組中分別給予空白、大黃素、小檗堿、地塞米松進(jìn)行干預(yù)，并與對(duì)照組進(jìn)行比較，通過葡萄糖氧化酶、蒽酮法、RT—PCR法檢測(cè)培養(yǎng)液中

4、葡萄糖含量、細(xì)胞內(nèi)糖原含量及HepG2細(xì)胞上瘦素長(zhǎng)型受體、短型受體mRNA的表達(dá)水平，觀察其對(duì)具有胰島素抵抗的HepG2細(xì)胞的治療作用。 4在HepG2細(xì)胞中加入高濃度的瘦素(10-6mol/L)做為模型組，在模型組中分別加入空白、大黃素、小檗堿及地塞米松，并與對(duì)照組進(jìn)行比較，用RT—PCR檢測(cè)細(xì)胞上瘦素長(zhǎng)型受體及短型受體mRNA的表達(dá)水平，觀察其對(duì)高濃度瘦素作用下的HepG2細(xì)胞的影響。 結(jié)果:1．MTT實(shí)驗(yàn)測(cè)得大黃素

5、、小檗堿可抑制HepG2細(xì)胞的生長(zhǎng)并可誘導(dǎo)其凋亡，這一作用呈劑量依賴性。大黃素濃度為10μmol/L時(shí)，HepG2存活率為90.8％，小檗堿濃度為10μmol/L時(shí)，HepG2存活率為91.3％，故本實(shí)驗(yàn)大黃素、小檗堿均采用10μmol/L作為實(shí)驗(yàn)濃度。 2對(duì)照組成為具有胰島素抵抗的HepG2細(xì)胞，且細(xì)胞上瘦素長(zhǎng)型及短型受體mRNA的表達(dá)水平較正常組顯著下降(P＜0.01)；而大黃素、小檗堿組培養(yǎng)液中葡萄糖含量、細(xì)胞內(nèi)糖原含量以

6、及細(xì)胞上瘦素長(zhǎng)型及短型受體mRNA的表達(dá)水平較正常組無明顯改變(P＞0.05)。 3大黃素、小檗堿、地塞米松組培養(yǎng)液中葡萄糖含量及細(xì)胞內(nèi)糖原含量較模型組明顯改善(P＜0.01)，細(xì)胞上瘦素長(zhǎng)型及短型受體mRNA的水平明顯上調(diào)(P＜0.01)，較正常組無明顯改變(P＞0.05)。 4模型組細(xì)胞上瘦素長(zhǎng)型受體及短型受體mRNA的表達(dá)水平較對(duì)照組顯著下調(diào)(P＜0．01)，大黃素、小檗堿及地塞米松較模型組顯著上調(diào)(P＜0.01)

7、，較對(duì)照組無明顯改變(P＞0.05)。 結(jié)論:1大黃素、小檗堿均能預(yù)防HepG2細(xì)胞產(chǎn)生胰島素抵抗，這一作用與它們影響培養(yǎng)液中葡萄糖含量、細(xì)胞內(nèi)糖原含量及HepG2細(xì)胞上瘦素受體mRNA表達(dá)水平有關(guān)。 2大黃素、小檗堿均能增加培養(yǎng)液中葡萄糖的消耗，增加細(xì)胞內(nèi)糖原含量，上調(diào)瘦素受體mRNA的表達(dá)水平，表示它們可通過調(diào)節(jié)糖代謝及瘦素受體的表達(dá)水平來治療胰島素抵抗。 3大黃素和小檗堿具有通過上調(diào)瘦素受體mRNA的表達(dá)來