結(jié)核性胸膜炎中的Th27細(xì)胞的分化途徑.pdf

1、目的：探索人類結(jié)核性胸腔積液（Tuberculosis pleuraleffusion, TPE）中分泌IL-27的CD4+T細(xì)胞；探索體外誘導(dǎo)naiveCD4+ T細(xì)胞分化為Th27細(xì)胞的細(xì)胞因子及其胞內(nèi)信號(hào)通路；探索Th27細(xì)胞的特征轉(zhuǎn)錄因子。
　　方法：以流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)核性胸膜炎患者TPE及外周血（Peripheral blood, PB）CD4+T細(xì)胞中IL-27、IFN-γ、IL-4、IL-9、IL-17和IL-22，

2、c-Fos、T-bet、GATA-3、PU.1、RORγt和AHR的表達(dá)水平；體外用IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-9等細(xì)胞因子及其不同組合，誘導(dǎo)naiveCD4+T細(xì)胞分化，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)分化過程中IL-27、c-Fos、T-bet、以及STAT家族蛋白磷酸化的表達(dá)水平，并且采用STAT阻斷劑，觀察其對(duì)Th27細(xì)胞分化效應(yīng)的影響；核轉(zhuǎn)染c-Fos-siRNA、T-bet-siRNA，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其對(duì)Th27細(xì)胞分化效

3、應(yīng)的影響。
　　結(jié)果：TPE中Th27細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞比例顯著低于PB；TPE中Th27細(xì)胞百分比與Th1細(xì)胞（IFN-γ+IL-27-CD4+cells）百分比呈線性負(fù)相關(guān)關(guān)系；TPE及PB中Th27細(xì)胞表達(dá)高水平c-Fos及中等量的T-bet，并且不表達(dá)IL-4、IL-9、IL-17和IL-22，以及相應(yīng)Th亞群轉(zhuǎn)錄因子GATA-3、PU.1、RORγt和AHR。
　　體外實(shí)驗(yàn)表明，IL-1β、I L-2、IL-12

4、既可單獨(dú)又可組合促進(jìn)na ive C D4+T細(xì)胞向Th27細(xì)胞分化，同時(shí)促進(jìn)c-Fos及T-bet在CD4+T細(xì)胞中的表達(dá)，IL-1β+IL-2 +IL-12促進(jìn)效應(yīng)最強(qiáng)，而TGF-β卻抑制這一分化過程；IL-1β+I L-2+IL-12對(duì)IL-27、c-Fos、T-bet表達(dá)的促進(jìn)作用呈時(shí)間依賴性。
　　IL-1β+IL-2+IL-12可顯著誘導(dǎo)naiveCD4+T細(xì)胞中磷酸化蛋白STAT3(ser727)、STAT

5、4（tyr693）、STAT5（tyr694）的表達(dá)；分別添加STAT3、STAT4、STAT5抑制劑后，naiveCD4+T細(xì)胞在IL-1β+IL-2+IL-12誘導(dǎo)環(huán)境中IL-27、c-Fos、T-bet的表達(dá)減少，同時(shí)添加STAT3、S TAT4、STAT5抑制劑產(chǎn)生的抑制效應(yīng)最強(qiáng)。
　　核轉(zhuǎn)染c-Fos-siRNA、T-bet-siRNA后，IL-1β+IL-2+IL-12誘導(dǎo)的naiveCD4+T細(xì)胞向Th27細(xì)胞分化受

6、抑，共轉(zhuǎn)染c-Fos-siRNA+T-bet-siRNA后，產(chǎn)生的抑制效應(yīng)最強(qiáng)。
　　結(jié)論：實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，TPE中存在一種全新輔助性T細(xì)胞亞群——Th27細(xì)胞。在體外，IL-1β、IL-2、IL-12及其組合可通過誘導(dǎo)磷酸化蛋白STAT3(ser727)、STAT4（tyr693）、STAT5（tyr694）表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)naiveCD4+T細(xì)胞向Th27細(xì)胞分化；c-Fos及T-bet表達(dá)于Th27細(xì)胞，并且對(duì)Th27細(xì)胞的分化