超聲微泡破裂法促進(jìn)骨形成蛋白-2基因在小鼠骨骼肌表達(dá)的研究.pdf

1、骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2(Bone Morphogenetic Protein-2，BMP-2)作為一種強(qiáng)效誘骨因子，可誘導(dǎo)具有成骨分化潛能的間質(zhì)細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化，在牙周組織再生和修復(fù)中具有重要的作用。但將外源性生長(zhǎng)因子直接植入缺損部位，其存在的時(shí)間及濃度是有限的，往往難以達(dá)到牙周組織完全再生的需要?；蛑委熂夹g(shù)引入牙周病治療的研究領(lǐng)域，為促進(jìn)牙周組織的完全再生提供了新的方向。 將DNA導(dǎo)入宿主的方法和途徑是多種多樣的，其中裸質(zhì)粒直

2、接注射法是公認(rèn)的一種既簡(jiǎn)便又有效的方法，并且安全性高，被認(rèn)為是基因治療的發(fā)展方向。但是質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染效率較低，所以尋找提高質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率的方法是目前基因治療研究的熱點(diǎn)之一。最近，國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)超聲微泡造影劑可作為一種新型的體內(nèi)基因轉(zhuǎn)染載體，在一定條件的超聲照射下能促進(jìn)目的基因安全而有效的定向轉(zhuǎn)移，增加外源性基因轉(zhuǎn)化率和表達(dá)水平，該方法有可能成為基因治療研究中新的突破點(diǎn)。 因此本實(shí)驗(yàn)采用超聲微泡破裂法將含增強(qiáng)型綠色熒光蛋白的重組BM

3、P-2質(zhì)粒plRES-rhBMP2-EGFP進(jìn)行小鼠后肢骨骼肌體內(nèi)轉(zhuǎn)染，研究微泡造影劑在超聲作用下能否促進(jìn)BMP-2基因在小鼠體內(nèi)表達(dá)，為其介導(dǎo)的BMP-2直接基因療法在牙周再生中應(yīng)用的可行性提供初步實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。 方法： 24只BALB/c小鼠隨機(jī)分為4組，每組6只，A組和B組選擇右側(cè)脛前肌為注射點(diǎn)，其中A組注射質(zhì)粒，B組注射質(zhì)粒與微泡造影劑的混合液后用超聲輻照，質(zhì)粒注射量為3μg；C組和D組選擇右側(cè)股四頭肌為注射點(diǎn)，其中

4、C組注射質(zhì)粒，D組注射質(zhì)粒和微泡造影劑的混合物后用超聲輻照，質(zhì)粒注射量為100μg。7天后處死A組和B組小鼠，取小鼠脛前肌在倒置熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白的表達(dá)情況，14天后處死C組和D組小鼠，取股四頭肌免疫組化檢測(cè)hBMP-2表達(dá)情況。 結(jié)果： 7天后B組綠色熒光陽(yáng)性肌纖維百分率高于A組(P＜0.05)；14天后，C組和D組都可檢測(cè)到hBMP-2的表達(dá)，但D組hBMP-2表達(dá)量多于C組(P＜0.05)。 結(jié)論