Ad-hBMP-2基因轉染骨骼肌衛(wèi)星細胞體外成骨分化的實驗研究.pdf

1、　　目的：
　　1.探討骨骼肌衛(wèi)星細胞體外分離培養(yǎng)、鑒定的方法,研究骨骼肌衛(wèi)星細胞的生物學特性,為后續(xù)的實驗奠定基礎。
　　2.評價腺病毒介導的人骨形態(tài)發(fā)生蛋白2(Ad-hBMP-2)基因體外轉染骨骼肌衛(wèi)星細胞后,肌衛(wèi)星細胞分化為成骨樣細胞的能力；并測定基因轉染后目的基因體外表達的情況。應用Ad-GFP基因轉染肌衛(wèi)星細胞,測定腺病毒轉染的效率。為應用骨骼肌衛(wèi)星細胞修復骨缺損提供實驗依據(jù)。
　　方法：
　　1.采用

2、Ⅰ型膠原酶和胰蛋白酶二步消化法獲取大鼠骨骼肌衛(wèi)星細胞,進行體外原代和傳代培養(yǎng)。觀察細胞的形態(tài),通過生長曲線、細胞融合率等指標研究骨骼肌衛(wèi)星細胞的增殖與分化能力,利用免疫細胞化學染色對所獲得的細胞進行鑒定。
　　2.Ad-hBMP-2基因體外轉染骨骼肌衛(wèi)星細胞后,通過形態(tài)學觀察、生長曲線的測定、堿性磷酸酶(ALP)細胞化學染色及活性檢測、骨鈣素(OC)及Ⅰ型膠原的免疫細胞化學染色、礦化結節(jié)形成實驗和Western—blot,觀察Ad